معلومة

يتم الحصول على بلازميد الحيوانات الأليفة 28 أ من أي نوع من السلالة البكتيرية

يتم الحصول على بلازميد الحيوانات الأليفة 28 أ من أي نوع من السلالة البكتيرية


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أريد أن أطرح بعض الأسئلة المربكة للغاية أن Pet28a عبارة عن ناقل. أريد أن أعرف أي سلالة من البكتيريا تحتوي على بلازميد pet28a؟ بكتريا قولونية DH5 ألفا سلالة لها بلازميد pet28a؟ الرجاء مساعدتي ... الرجاء الإجابة على هذا السؤال


CugP عبارة عن بكتيرية جديدة في كل مكان غير GalU من نوع UDP-Glucose Pyrophosphorylase الموجود في البكتيريا الزرقاء

يقوم بيروفوسفوريلاز UDP-glucose بتخليق UDP-glucose من UTP و glucose 1-phosphate ويوجد في جميع الأنواع تقريبًا. تمتلك معظم البكتيريا بيروفوسفوريلاز الجلوكوز UDP من نوع GalU ، في حين أن العديد من أنواع البكتيريا الزرقاء لا تمتلكه. في بعض البكتيريا الزرقاء ، يتم استخدام UDP-glucose كركيزة لتخليق السليلوز الخارجي على الرغم من عدم وجود بيروفوسفوريلاز الجلوكوز UDP من نوع GalU. لذلك ، يجب أن يكون هناك بيروفوسفوريلاز الجلوكوز UDP غير معهود في البكتيريا الزرقاء. هنا ، نظهر أن جميع البكتيريا الزرقاء تمتلك بيروفوسفوريلاز UDP-glucose بكتيري غير من نوع GalU ، أي CugP ، وهي عائلة جديدة في عائلة النوكليوتيد ثلاثي فوسفات ترانسفيراز. المؤتلف أعرب متزامن ص. سلالة PCC 6803 CugP لها نشاط بيروفوسفوريلاز الذي كان شديد الخصوصية لـ UTP والجلوكوز 1-فوسفات. حقيقة أنه لا يمكن حذف جين CugP بالكامل متزامن ص. يقترح PCC 6803 دوره المركزي كمورد الركيزة لتخليق الجالاكتوليبيد. Galactolipids هي المكونات الرئيسية لغشاء الثايلاكويد التمثيل الضوئي وهي مهمة لنشاط التمثيل الضوئي. استنادًا إلى تحليل النشوء والتطور ، ربما تم مؤخرًا نقل بيروفوسفوريلاز الجلوكوز من نوع CugP هذا أفقيًا إلى بعض أنواع البكتيريا غير الزرقاء.


مقدمة

أدت زيادة استهلاك الطاقة والأثر البيئي الضار للوقود الأحفوري إلى زيادة الاهتمام بتطوير مصادر الطاقة المستدامة والمتجددة. يعد استخدام الكائنات الدقيقة المهندسة لإنتاج المواد الكيميائية من الكتلة الحيوية المتجددة بديلاً واعدًا للوقود والمواد الكيميائية المشتقة من البترول. تعتبر المركبات المشتقة من الأحماض الدهنية واعدة بشكل خاص لأن مشتقات الأحماض الدهنية منخفضة للغاية ، وهي مركبات أليفاتية ذات كثافة طاقة عالية غير قابلة للامتزاج بالماء 1. والجدير بالذكر أن تشابهها مع وقود الديزل يجعلها متوافقة مع البنية التحتية الحالية. نتيجة لذلك ، تم تطوير العديد من الاستراتيجيات للإفراط في إنتاج الأحماض الدهنية الميكروبية ومن ثم تحويل الأحماض الدهنية إلى وقود حيوي مثل الألكانات والكحولات الدهنية وميثيل الأحماض الدهنية أو إسترات الإيثيل 2،3،4،5،6،7،8.

يعتبر الإنتاج الميكروبي لميثيل الأحماض الدهنية أو إسترات الإيثيل (FAME ، FAEE على التوالي) ذا أهمية خاصة لأن FAME و FAEE هما المكون الرئيسي للديزل الحيوي المستخدم حاليًا. عادة ، يتم تصنيع وقود الديزل الحيوي عن طريق الأسترة التبادلية لزيوت الجليسريد الثلاثي المستخرجة من الكتلة الحيوية المتجددة باستخدام كحول قصير السلسلة (مثل الميثانول أو الإيثانول) باستخدام محفز قلوي 9. ومع ذلك ، فإن استخدام زيوت المواد الأولية اللازمة لإنتاج وقود الديزل الحيوي يمثل عقبة رئيسية أمام الاستخدام الأوسع للديزل الحيوي بسبب نقص الأراضي الصالحة للزراعة والمنافسة مع الإمدادات الغذائية. لذلك ، فإن البديل المحتمل للديزل الحيوي المستند إلى الزيوت النباتية والحيوانية هو الإنتاج الحيوي المباشر للديزل الحيوي في الكائنات الحية الدقيقة المهندسة التمثيل الغذائي (تمت مراجعته في 10).

كان Steinbuchel وزملاؤه أول من طور مسارًا لإنتاج وقود الديزل الحيوي FAEE في بكتريا قولونية، وتم تطوير نهجهم بشكل أكبر من قبل مجموعة Keasling لزيادة إنتاجية FAEE والكحوليات الدهنية 2،4،7. لإنتاج FAEEs ، تم تقديم مسارين متعامدين يولدان في نفس الوقت الإيثانول والأسيل الدهني CoA. في الخطوة الأخيرة ، تم بعد ذلك تكثيف الإيثانول و acyl-CoA الدهني إلى FAEE باستخدام سينثيز إستر الشمع (الشكل 1) 2،7. بعد التحسين ، تم الحصول على عيارات تصل إلى 1.5 جرام من سلسلة FAEEs الطويلة لكل لتر من الثقافة.

تم تنفيذ مسار الأجسام الدقيقة FAEE مسبقًا في بكتريا قولونية محدد في اللوحة اليسرى باللون الرمادي 3،7. في مسار FAEE ، يتم إنتاج الإيثانول عن طريق إدخال بيروفات ديكاربوكسيلاز (PDC) وكحول ديهيدروجينيز (adhB) من عند زيموموناس موبيلوس. يتم إنتاج ثيويستر أسيل الإنزيم A (CoA) في وقت واحد عن طريق تحويل التخليق الحيوي للأحماض الدهنية مع التعبير عن العديد من thioesterases (TES) وخميرة acyl-CoA ligase (ACL). يقوم مركب إستر الشمع (atfA) بتكثيف الإيثانول والأسيل- CoA لصنع FAEE. في هذه الدراسة (الصندوق المتقطع ، أسود / أخضر) ، يتم إنتاج وقود الديزل الحيوي عن طريق إدخال دJHAMT في سلالة إنتاج الأحماض الدهنية. يتم إثراء تجمع الأحماض الدهنية الحرة متوسطة السلسلة (FFA) عن طريق التعبير يو كاليفورنيكا acyl-ACP thioesterase (BTE) في تأكسد β و phospholipid ناقص التوليف بكتريا قولونية سلالة (Δبدعة Δaas). ثم تتم ميثلة الأحماض الدهنية الأحيائية متوسطة السلسلة في س-الأدينوزيل-L-ميثيونين (SAM) - طريقة تعتمد على استرات ميثيل الأحماض الدهنية (FAMEs) بواسطة دJHAMT. يتم تنظيم مستويات SAM الداخلية عن طريق إدخال س-جين أدينوزيل ميثيونين synthetase Mat1A من كبد الفئران إلى بكتريا قولونية الجينوم. FA ، الأحماض الدهنية ACP ، بروتين ناقل الأسيل GPE ، الجلسيروفوسفويثانولامين SAM ، س-أدينوسيل- L- ميثيونين SAH ، س-adenosylhomocysteine ​​FadD ، acyl-CoA synthetase Aas ، 2-Acyl-GPE acyltransferase / acyl-ACPsynthase BTE ، يو كاليفورنيكا أسيل- ACP thioesterase Mat1A ، الفئران س-إنزيم الأدينوزيل ميثيونين دJHAMT ، D. melanogaster حمض هرمون الأحداث س-ميثيل ترانسفيراز.

كنهج أكثر وضوحًا لإنتاج وقود الديزل الحيوي في الكائنات الحية الدقيقة ، حاولت مجموعة Lykidis إنتاج FAMEs في بكتريا قولونية من خلال المثيلة المباشرة للأحماض الدهنية بفعل س-أدينوزيل-L-الميثيونين (SAM) المعتمد على ميثيل ترانسفيراز الجرثومي من M. marinum 3. يتميز مسار Lykidis بكونه أبسط بكثير من مسار إنتاج FAEE باستخدام المركبات الذاتية (SAM والأحماض الدهنية) المنتجة في بكتريا قولونية. ومع ذلك ، فإن عيارات FAME التي تم الحصول عليها كانت أقل بمرتين تقريبًا من عيارات FAEE (16 مجم / لتر). من المحتمل أن يكون المستوى المنخفض من إنتاج FAME بسبب الخصوصية العالية لميثيل ترانسفيراز المستخدم ، والذي يفضل الأحماض الدهنية النادرة التي تحتوي على مجموعة 3 هيدروكسي 3.

افترضنا أنه إذا تمكنا من العثور على مجموعة واسعة من ميثيل ترانسفيراز الأحماض الدهنية ، فربما يمكننا تحسين نهج Lykidis لإنتاج FAME. هنا نظهر ذلك ذبابة الفاكهة سوداء البطن حمض هرمون الأحداث ا-ميثيل ترانسفيراز (دJHAMT) خصوصية واسعة للأحماض الدهنية الحرة متوسطة السلسلة ويمكن استخدامها لإنتاج FAMEs في بكتريا قولونية. من خلال تقديم دJHAMT للهندسة بكتريا قولونية سلالات تتحمل مستويات عالية من الأحماض الدهنية متوسطة السلسلة المنتجة محليًا ، لاحظنا في الجسم الحي إنتاج FAME 11. أدى إثراء تجمع SAM الداخلي إلى زيادة إنتاج FAME مع التتر النهائي الذي أظهر زيادة بمقدار 35 ضعفًا عن التتر الذي تم الإبلاغ عنه سابقًا 3.


الإفراط في التعبير في الإشريكية القولونية وتنقية بروتين نقل OCTN1 البشري

تم استنساخ hOCTN1 الذي تم تضخيمه من الحمض النووي الريبي للخلايا الليفية الجلدية في pET-28a (+) أو في بلازميد pH6EX3. نتج عن hOCTN1 المؤتلف بروتين اندماج مكون من 6 علامات مع تسلسل N-terminal إضافي 34 أو 21 حمض أميني في pET-28a (+) - hOCTN1 أو في تركيبات pH6EX3-hOCTN1 ، على التوالي. تم استخدام كلا البناءين للتعبير عن hOCTN1 في Escherichia coli Rosetta (DE3) pLysS. تم الحصول على أفضل تعبير زائد باستخدام pH6EX3-hOCTN1 بعد 6 ساعات من التحريض باستخدام IPTG عند 28 درجة مئوية. تم جمع البروتين المعبر ذو الكتلة الجزيئية الظاهرة 54 كيلو دالتون ، في الجزء غير القابل للذوبان من محللة الخلية. تم الحصول على مزيد من التحسين باستخدام سلالة E. coli RosettaGami2 (DE3) pLysS للتعبير عن البروتين المشفر بواسطة pH6EX3-hOCTN1. بعد 6 ساعات من الحث مع IPTG عند 28 درجة مئوية ، يمثل hOCTN1 30 ٪ من إجمالي البروتين في الحبيبات غير القابلة للذوبان. تم غسل جزء البروتين هذا باستخدام Triton X-100 و deoxycholate ، وتم إذابته باستخدام محلول يحتوي على 0.8 ٪ من Sarkosyl ، و 3 M يوريا وتم تطبيقه على عمود كروماتوجرافي Ni2 + خبيث. تمت تصفية hOCTN1 المنقى بشكل متجانس باستخدام محلول مؤقت يحتوي على 50 ملي إيميدازول و 0.1٪ تريتون X-100 و 50 ملي مركابتوإيثانول. تم الحصول على محصول يبلغ حوالي 3 ملغ من البروتين المنقى لكل لتر من المزرعة الخلوية.


تحديد وتوصيف جينات التخليق الحيوي للخلايا العصبية والتعبير غير المتجانسة عن مجموعة الجينات ectABC من Halomonas sp. QHL1 ، وهي بكتيريا معتدلة الملوحة معزولة من بحيرة تشينغهاي

البكتيريا الملحية بشكل معتدل Halomonas sp. تم تحديد QHL1 كعضو في جنس Halomonas بواسطة تسلسل الجين 16S rRNA. أظهر تحليل HPLC أن سلالة QHL1 تصنع الأكتوين في السيتوبلازم. تم تحديد الجينات المشاركة في مسار التخليق الحيوي للخلايا على الكروموسوم بالترتيب ectABC. بعد ذلك ، تم تضخيم الجين ectB من هذه السلالة بواسطة PCR ، وتم استنساخ مجموعة الجينات ectABC بالكامل (3580 نقطة أساس) باستخدام المشي الجينومي. أظهر التحليل أن الجينات ectA (579 bp) و ectB (1269 bp) و ectC (390 bp) تم تنظيمها في وحدة نسخ واحدة وتوقع أن تشفر ثلاثة ببتيدات تبلغ 21.2 كيلو دالتون و 46.4 كيلو دالتون و 14.7 كيلو دالتون على التوالي. تم تحديد اثنين من المروجين المفترضين ، مروج مستقل δ (70) ومروج متحكم فيه δ (38) ، بالإضافة إلى العديد من الزخارف المحفوظة ذات الوظيفة غير المعروفة. تم إدخال جينات ectA و ectB و ectC الفردية ومجموعة الجينات ectABC بأكملها في التعبير البلازميد pET-28a (+) لتوليد البلازميدات المؤتلفة pET-28a (+) - ectA ، pET-28a (+) - ectB ، pET-28a (+) - ectC و pET-28a (+) - ectABC ، ​​على التوالي. تم تأكيد التعبير غير المتماثل لهذه البروتينات في الإشريكية القولونية BL21 (DE3) بواسطة SDS-PAGE. أظهرت سلالة الإشريكية القولونية BL21 المؤتلفة (pET-28a (+) - ectABC) تحملًا أعلى للملح من خلايا الإشريكية القولونية الأصلية ولكنها أنتجت أقل بكثير من سلالة QHL1 من النوع البري.


مناقشة

تثير نتائجنا ثلاث نقاط مهمة: (1) قد تلعب PEPC دورًا رئيسيًا كمحور استقلابي في التحكم في اتجاهات بعض مسارات التمثيل الغذائي. على سبيل المثال ، حتى تنظيم بيبك قد يؤدي التعبير إلى زيادة التخليق الحيوي للأحماض الأمينية وتراكم البروتين ، في حين يبدو أن التنظيم النازل يؤدي إلى زيادة تراكم الدهون. (2) استخدام جزء صغير فقط (1/7) من C.reinhardtii بيبك2 كان الجين فعالًا في تنظيم التعبير عن بكتريا قولونية بيبك الجين في متحولة عكسية ، كما لوحظ في تجارب RNAi السابقة (Deng et al. 2011) ، على الرغم من معدل نمو مماثل للخلايا من النوع البري. (3) صعودا وهبوطا التنظيم بكتريا قولونية كانت تسيطر عليها الطحالب بيبك2 ، مما يشير إلى تجانس بنيوي وثيق بين إنزيمات بدائية النواة وأنزيمات حقيقية النواة. تشير هذه النتائج إلى أن طريقة الناقل العكسي يمكن أن تثبت أنها طريقة وراثية عكسية فعالة للدراسات الوظيفية وأيضًا للتطبيقات الصناعية المحتملة مثل الكائنات الهندسية لإنتاج الديزل الحيوي.

الضربة القاضية الجينية والضربة القاضية هي طرق قوية ومستخدمة على نطاق واسع لدراسة وظيفة الجينات. في كثير من الأحيان ، يمكن تحديد وظيفة الجين من خلال التحول الروتيني والتعبير غير المتجانسة في الكائنات الحية النموذجية مثل بكتريا قولونية. ومع ذلك ، كان التقدم في الدراسات الجينية العكسية أبطأ بكثير في بدائيات النوى منه في الكائنات حقيقية النواة ، مما يحد بكتريا قولونية ككائن نموذج لتجارب الجينوم الوظيفي. منذ حوالي 15 عامًا ، بدأنا في التحقيق في مناهج الجينات العكسية بكتريا قولونية باستخدام glnA جين الجلوتامين المركب (تشين وآخرون 1999). على الرغم من التقدم المحرز ، اقتصرت دراساتنا السابقة على الجينات بدائية النواة (Hou et al. 2008 Jia et al. 2012). في هذه الدراسة ، أثبتنا أن الطحالب حقيقية النواة بيبك2 قادر على تقليل تنظيم التعبير عن بكتريا قولونية بيبك من خلال علم الوراثة العكسي.

تكون تسلسلات معظم الجينات حقيقية النواة طويلة نسبيًا ، وغالبًا ما تكون قدرة نواقل التعبير بدائية النواة محدودة. يعد اختيار جزء الجين المهم وظيفيًا أمرًا ضروريًا للتطبيق الناجح لطريقة المتجه العكسي. الجزء 639 نقطة أساس من بيبكتم اختيار الشكل 2 المستخدم في هذه الدراسة بالرجوع إلى دراسة التطور الجزيئي التي أجراها Gehrig et al. (1998).

كانت الزيادة القصوى في إجمالي محتوى الدهون 28 ٪ ، وهي أقل إلى حد ما من تلك التي أبلغ عنها هو وآخرون. (2008) ، الذي وجد هذا التحول بكتريا قولونية مع أنابينا 7,120 بيبك مع ناقل التعبير العكسي زاد محتوى الدهون الكلي بنسبة 47٪. قد يرتبط هذا الاختلاف بدرجة الهوية بين التسلسل الجيني C.reinhardtii بيبك2 و بكتريا قولونية بيبك هي 65٪ متطابقة ، بينما أنابينا 7،120 و بكتريا قولونية بيبك الجين 72٪ متطابق.

لا يشارك النشاط التحفيزي لـ PEPC بشكل مباشر في التخليق الحيوي للأحماض الدهنية. أسفل تنظيم بيبك يقلل oxaloacetate (OAA) ، وهو مادة سليفة في التخليق الحيوي للأحماض الأمينية ، ويزيد من البيروفات والأسيتيل CoA ، وهي السلائف الرئيسية في التخليق الحيوي للأحماض الدهنية (Beck et al. 2012). مجتمعة ، تشير نتائجنا إلى أن التنظيم المنخفض لـ بيبك قد يؤدي التعبير إلى زيادة تنظيم بيروفات كيناز وبالتالي مستويات البيروفات ونزعات هيدروجين البيروفات التي تحفز التخليق الحيوي لأسيتيل CoA وأسيتيل CoA carboxylase الذي يصنع مباشرة أسيتيل CoA (Beck et al. 2012). لذلك قد تعمل PEPC كمحور استقلابي ينظم مسارات متعددة في وقت واحد. قد يكون الفهم الأفضل لدور PEPC في مسارات استقلاب الطحالب الدقيقة مفيدًا للتطبيقات الصناعية مثل إنتاج الديزل الحيوي.


موضوعي

سيراتيا س. S2 هو سلالة برية مع مقاومة الكروم والقدرة على الاختزال. تم استنساخ الكروم (VI) جين ترميز البروتين الأيضي ChrA و ChrT من سيراتيا س. S2 ، والمربوطة مع نواقل التعبير بدائية النواة pET-28a (+) وتحويلها إلى بكتريا قولونية BL21 لبناء البكتيريا المهندسة ChrA و ChrT و ChrAT. من خلال دراسة خصائص استقلاب Cr (VI) في البكتيريا المهندسة ، تمت دراسة وظيفة وآلية التعبير الوحيد والتعايش بين جينات ChrA و ChrT.

أساليب

استخدام سيراتيا س. تم تضخيم جينوم S2 كقالب ، جينات ChrA و ChrT بواسطة PCR ، وتم ربط نواقل التعبير بدائية النواة لتشكيل البلازميد المؤتلف pET-28a (+) - ChrA ، pET-28a (+) - ChrT و pET-28a (+) - ChrAT وتحويلها إلى بكتريا قولونية BL21 لبناء البكتيريا المهندسة ChrA و ChrT و ChrAT. تم قياس منحنى النمو ، والتسامح ، والحد من Cr (VI) ، وتوزيع Cr داخل الخلايا وخارجها ، ونشاط اختزال الكروم والضغط التأكسدي داخل الخلايا في البكتيريا المهندسة لاستكشاف الخصائص الأيضية لـ Cr (VI) في ChrA ، ChrT ، البكتيريا المهندسة ChrAT.

نتائج

تم بناء البكتيريا المهندسة ChrA و ChrT و ChrAT بنجاح بواسطة تقنية إعادة التركيب الجيني. كان التسامح مع Cr (VI) سيراتيا س. S2 & gt ChrAT ≈ ChrA & gt ChrT & gt Control (P & lt 0.05) ، وقدرة التخفيض على Cr (VI) كانت سيراتيا س. S2 & gt ChrAT ≈ ChrT & gt ChrA (P & lt 0.05). أكدت تجارب توزيع الكروم أن Cr (VI) و Cr (III) كانا حالات التكافؤ الرئيسية. كان تأثير مانحين الإلكترون على نشاط اختزال الكروم NADPH & gt NADH & gt non-NAD (P) H (P & lt 0.05). زاد نشاط اختزال الكروم بشكل ملحوظ مع NAD (P) H (P & lt 0.05). زادت مستويات الجلوتاثيون و NPSH (غير البروتين سلفهيدريل) للبكتيريا المهندسة ChrA و ChrA بشكل ملحوظ (P & lt 0.05) في حالة Cr (VI) ، ولكن لم يكن هناك فرق كبير في مؤشرات البكتيريا المهندسة ChrT (P & gt 0.05) ).

استنتاج

تمتلك البكتيريا المهندسة ChrAT مقاومة وقدرات تقليل لـ Cr (VI). يمنح بروتين ChrA الإجهاد القدرة على مقاومة Cr (VI). يقلل بروتين ChrT من Cr (VI) إلى Cr (III) باستخدام NAD (P) H كمانح إلكتروني. تعزز عملية الاختزال إنتاج GSH و GSSG و NPSH للحفاظ على حالة الاختزال داخل الخلايا ، مما يحسن أيضًا تحمل Cr (VI) وقدرة تقليل البكتيريا المهندسة ChrAT.


التعبير في الإشريكية القولونية لبوليميراز الحمض النووي القابل للحرارة من Pyrococcus furiosus

Pfu ، بوليميريز الحمض النووي من Pyrococcus furiosus ، لديه أدنى معدل خطأ من أي بوليميراز معروف في تضخيم تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR). تم تنقية البروتين سابقًا من المزارع البكتيرية P. furiosus ، وتم إنتاج شكل مؤتلف في نظام baculovirus. لقد أنتجنا بلازميد pET للتعبير عن Pfu في Escherichia coli (يتوفر التعبير plasmid pETpfu من ATCC ، رقم المدخل 87496) ووجدنا أن هذا البلازميد سام أو غير مستقر في سلالة التعبير BL21 (DE3) ، حتى في حالة عدم وجوده. من الاستقراء. ومع ذلك ، كان البلازميد مستقرًا في BL21 (DE3) الذي يحتوي على بلازميد pLysS ، الذي يمنع التعبير قبل الحث ، وتم التعبير عن بروتين 90 كيلو دالتون عند إضافة isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside. تمت تنقية البروتين عن طريق التسخين (لتفسد طبيعة بروتينات E. coli) ، متبوعًا بالكروماتوجرافيا على أعمدة P11 فسفوسليلوز و mono Q. كان للبروتين المنقى نفس نشاط Pfu الذي تم الحصول عليه تجاريًا من فيروس baculovirus في كل من تفاعلات DNA polymerase و PCR. يبدو أن نظام التعبير البكتيري هذا هو الطريقة المفضلة لإنتاج Pfu.


تعبير إفرازي إشارة الببتيد المستقل وتوصيف بولولانايز من معزول حديثًا Klebsiella varicola SHN-1 بوصة الإشريكية القولونية

تم الحصول على سلالة مع القدرة على إنتاج بولولانيز خارج الخلية من العينة المأخوذة من مطحنة الدقيق. من خلال تسلسل 16S rDNA ، تم تحديد العزلة على أنها Klebsiella varicola SHN-1. عندما تم استنساخ الجين المشفر pullulanase ، الذي يحتوي على تسلسل إشارة N-terminal ، فيه الإشريكية القولونية BL21 (DE3) ، تم اكتشاف نشاط خارج الخلية يصل إلى 10 U / ml ، وهو مستوى أعلى مقارنة بالنتائج في الأدبيات المنشورة. في وقت لاحق ، تم تنقية Pullulanase المؤتلف وتمييزه. تم تحديد المنتج النهائي الرئيسي من pullulan المتحلل بواسطة pullulanase المؤتلف على أنه مالتوتريوز مع HPLC ، وبالتالي ، تم تحديد pullulanase المؤتلف على أنه النوع الأول pullulanase ، والذي يمكن استخدامه بكفاءة في معالجة النشا لإنتاج المالتوتريوز بنقاوة أعلى وحتى لتقييم النقاوة بولولان. لاستقصاء تأثير ببتيد الإشارة على إفراز الإنزيم المؤتلف ، تمت إزالة تسلسل الإشارة من المتجه المركب. ومع ذلك ، فإن إفراز بولولانيز في ه. القولونية لم تتأثر ، والتي نادرا ما تم الإبلاغ عنها سابقا. من خلال توطين توزيع pullulanase على الكسور الخلوية ، فإن إفراز مادة pullulanase المؤتلفة في ه. القولونية تم تأكيد BL21 (DE3) ، حتى من نظام التعبير من النوع غير السري دون مساعدة إشارة الببتيد.

هذه معاينة لمحتوى الاشتراك ، والوصول عبر مؤسستك.


حدث خطأ أثناء تعيين ملف تعريف ارتباط المستخدم الخاص بك

يستخدم هذا الموقع ملفات تعريف الارتباط لتحسين الأداء. إذا كان متصفحك لا يقبل ملفات تعريف الارتباط ، فلا يمكنك مشاهدة هذا الموقع.

إعداد المستعرض الخاص بك لقبول ملفات تعريف الارتباط

هناك العديد من الأسباب لعدم تعيين ملف تعريف الارتباط بشكل صحيح. فيما يلي الأسباب الأكثر شيوعًا:

  • لديك ملفات تعريف الارتباط معطلة في متصفحك. تحتاج إلى إعادة تعيين متصفحك لقبول ملفات تعريف الارتباط أو أن تسألك عما إذا كنت تريد قبول ملفات تعريف الارتباط.
  • يسألك متصفحك ما إذا كنت تريد قبول ملفات تعريف الارتباط ورفضت. لقبول ملفات تعريف الارتباط من هذا الموقع ، استخدم زر الرجوع واقبل ملف تعريف الارتباط.
  • متصفحك لا يدعم ملفات تعريف الارتباط. جرب متصفحًا مختلفًا إذا كنت تشك في ذلك.
  • التاريخ الموجود على جهاز الكمبيوتر الخاص بك في الماضي. إذا كانت ساعة جهاز الكمبيوتر لديك تعرض تاريخًا قبل 1 يناير 1970 ، فسينسى المتصفح ملف تعريف الارتباط تلقائيًا. لإصلاح ذلك ، قم بتعيين الوقت والتاريخ الصحيحين على جهاز الكمبيوتر الخاص بك.
  • لقد قمت بتثبيت تطبيق يراقب أو يمنع تعيين ملفات تعريف الارتباط. يجب عليك تعطيل التطبيق أثناء تسجيل الدخول أو مراجعة مسؤول النظام لديك.

لماذا يتطلب هذا الموقع ملفات تعريف الارتباط؟

يستخدم هذا الموقع ملفات تعريف الارتباط لتحسين الأداء من خلال تذكر أنك قمت بتسجيل الدخول عندما تنتقل من صفحة إلى أخرى. لتوفير الوصول بدون ملفات تعريف الارتباط ، سيتطلب الموقع إنشاء جلسة جديدة لكل صفحة تزورها ، مما يؤدي إلى إبطاء النظام إلى مستوى غير مقبول.

ما الذي يتم تخزينه في ملف تعريف الارتباط؟

لا يقوم هذا الموقع بتخزين أي شيء سوى معرف الجلسة الذي يتم إنشاؤه تلقائيًا في ملف تعريف الارتباط ولا يتم التقاط أي معلومات أخرى.

بشكل عام ، يمكن فقط تخزين المعلومات التي تقدمها ، أو الخيارات التي تقوم بها أثناء زيارة موقع ويب ، في ملف تعريف ارتباط. على سبيل المثال ، لا يمكن للموقع تحديد اسم بريدك الإلكتروني إلا إذا اخترت كتابته. إن السماح لموقع ويب بإنشاء ملف تعريف ارتباط لا يمنح هذا الموقع أو أي موقع آخر إمكانية الوصول إلى بقية جهاز الكمبيوتر الخاص بك ، ويمكن فقط للموقع الذي أنشأ ملف تعريف الارتباط قراءته.


شاهد الفيديو: فحص الكروموسومات في حالات الاجهاض المتكرر و اليته (قد 2022).