معلومة

كيف يتم اختيار شرائح الحمض النووي في PCR؟

كيف يتم اختيار شرائح الحمض النووي في PCR؟



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

أفهم أنه في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) يمكننا تضخيم أجزاء مختارة فقط من الحمض النووي ... ولكن على الرغم من قراءته من مصادر متعددة ، لا يمكنني معرفة كيفية حدوث هذا الاختيار بالفعل.

أعلم أنه باستخدام البادئات المناسبة ، واحد لكل من خيوط الترميز والقالب ، يمكننا توجيه بوليميرات الحمض النووي إلى مواقع محددة للبدء بها. أفهم أيضًا أن هذه البادئات تجعل النسخ المتماثل يتقدم في اتجاهين متعاكسين ، تجاه بعضهما البعض. مثل ما يلي:

ومع ذلك ، أتساءل ما الذي يجعل النسخ المتماثل ينتهي عندما يصل البوليميراز إلى التمهيدي في الطرف الآخر؟ لأنه بقدر ما أفهم ، يجب أن يستمر النسخ المتماثل إلى أجل غير مسمى حتى يتم الوصول إلى النهاية المادية لشريط العينة ... بحيث يمكننا تحديد نقاط البداية ولكن ليس نقاط النهاية أبدًا.


ملاحظة: في برنامج PCR الخاص بك ، تقوم دائمًا بتعيين وقت التمديد.

قضية:

  • طول المنتج = 500 نقطة أساس
  • وقت تمديد PCR = 50 ثانية
  • بافتراض أن البوليميراز يضيف 1000 nt / min

الدورة 1:

  • السلك الذي يربط FP: يمتد بحوالي 800nt إلى اليمين (حسب معدل البلمرة): 300 نقطة أساس قبل موقع RP التكميلي. هذا المنتج دعنا نقولP1
  • الشريط الذي يربط RP: يمتد ~ 800nt إلى اليسار: 300 نقطة أساس قبل موقع FP التكميلي. هذا هوP2

الدورة 2:

تصبح منتجات الدورة الأولى قوالب للجولة التالية. يرتبط FP بـP2-300nt من نهايتها 3 '. وبالمثل ، يرتبط RP بـP1-300nt من نهايتها 3 '. ستكون المنتجات الناتجة 500nt مما يؤدي إلى إنتاج dsDNA مثالي 500 نقطة أساس.

بعضP1وP2سوف تستمر في التشكيل بمعدل خطي ؛ نظرًا لأن نموذجك منخفض الكمية مقارنة بمنتجات الدورة الأولى والدورة الثانية ، فإن منتج PCR المتوقع الخاص بك سيكون أعلى بكثير (والذي يتم إنتاجه بمعدل أسي).


لست واضحًا تمامًا عندما تقول "ما الذي يجعل النسخ المتماثل ينتهي عندما يصل البوليميراز إلى التمهيدي في الطرف الآخر" لأنك عندما تقوم بإجراء PCR تمر بثلاث مراحل. التمسخ ، حيث تصبح خيوط الحمض النووي مفردة السبل ، ثم التلدين ، وهو عندما تلتصق البادئات بموقع المطابقة المناسب لها (لكن قالب الحمض النووي الأصلي لا يزال منفردًا) والامتداد ، وهو عندما يستخدم بوليميراز الحمض النووي البادئات للتمديد اجعل الخيط المطابق متصلًا بالبرايمر (http://en.wikipedia.org/wiki/Polymerase_chain_reaction). يستمر بوليميراز الحمض النووي في صنع الخيط حتى يسقط بشكل أساسي أو حتى تنتهي الدورة وحان الوقت لتكرار الدورة نفسها. الطريقة التي تتأكد بها من إنهاء تكرار الحمض النووي المحدد بطول مناسب هي استخدام وقت التمديد كعنصر تحكم لأنه كما هو موضح في الإجابة أعلاه بواسطةWYSIWYG ، يُفترض إلى حد كبير أن الامتداد هو 1000 nt / min لذلك إذا كان منتجك من الفائدة 500 نقطة أساس ، فأنت تفعل 30-40 ثانية من التمديد في برنامج دورة تمديد PCR وإذا كان المنتج محل الاهتمام هو 1000 نقطة أساس ، فأنت تفعل 60 ثانية من التمديد وما إلى ذلك.

في التدريب الذي تلقيته ، لا يُنصح عادةً باستخدام قالب DNA PCR الذي يكون كبيرًا جدًا مثل البلازميد بأكمله مثل pUAST. المشكلة الرئيسية حتى مع بوليميرات الحمض النووي عالية الدقة / ذات القراءة المحترفة هي أنه يمكنك الحصول على أخطاء في النسخ المتماثل إذا كان الشريط طويلًا جدًا. ما يحدث غالبًا هو أنك تقوم بتضخيم جزء من الحمض النووي إذا كنت تريد التحقق من وجود شيء ما أو إذا كنت بحاجة إلى استخدام الجزء المكبر ، ثم تقوم بتصميم مواقع تقييد في أي من طرفي الجزء الخاص بك عن طريق دمجه في الاشعال نفسه ثم المضي قدما في عملية الهضم وتنقية الشظايا ثم تسلسل الجزء الخاص بك للتأكد من عدم وجود أي أخطاء على الرغم من أن تفاعل البوليميراز المتسلسل لديه الكثير من التطبيقات.


دراسة البيولوجيا الجزيئية كيف يعمل تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل؟ سفك الفيروس وانتقاله والمراضة و R0

تحية من مرصد بالميا

حسنًا ، نظرنا إلى سماء الليل لفترة وجيزة ، فقط لنلاحظ أن كوكب الزهرة وشظية صغيرة من القمر قريبان جدًا من بعضهما البعض ، لكن النشاط الرئيسي مرة أخرى هذا الأسبوع هو الاحتماء في مكانه ، حيث نظرنا أكثر في كيفية استخدام RT-PCR اختبار الفيروسات يعمل وبعض شروط نمذجة انتشار العدوى.

أولاً ، إذا كنت تتابع سلسلة محاضرات YouTube حول علم الفيروسات ، فمن المحتمل أنك اكتشفت الحاجة إلى وصف بعض البيولوجيا الجزيئية للخلايا والفيروسات كما تمت مناقشته في تلك المحاضرات. بالنسبة لي ، كنت قد درست البيولوجيا الجزيئية منذ سنوات عندما كنت مخمورا بفكرة العودة إلى المدرسة ودراسة الفيزياء الحيوية. حسنًا ، اتضح أنني أدركت أنني لم أكن ذكيًا بما يكفي للقيام بعمل التخرج هذا ، خاصة بعد أن التحقت بفصل الكيمياء العضوية وقررت ترك الدراسة بعد فصل دراسي. لكن لا يزال لدي نصًا جيدًا في علم الأحياء الدقيقة لا يزال مفيدًا جدًا لطالب علم الأحياء المبتدئ ، على الرغم من أن إصدار 2008 هذا ربما يكون قديمًا بعض الشيء الآن!

هذا الكتاب المدرسي الذي يزيد عن 1200 صفحة هو مقدمة جيدة جدًا لـ "البيولوجيا الجزيئية للخلية"
لكن الموضوع الذي أريد مراجعته هذه المرة هو تقنية بيولوجية جزيئية تسمى تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) والتي تستخدم للاختبار لاكتشاف الفيروسات في عينات المرضى. اختبار PCR للكشف عن الفيروس التاجي الحالي هو شكل معدل للاختبار يتضمن إضافة النسخ العكسي (RT) ، والذي يشار إليه الآن باسم RT-PCR. النسخة المعدلة ضرورية لأن تفاعل البوليميراز المتسلسل نفسه يستخدم في عينات الحمض النووي ، لكن الفيروس التاجي يعتمد على الحمض النووي الريبي وليس الحمض النووي.

لذلك ، يمكنك أن تقرأ عن PCR أو أن هناك العديد من مقاطع فيديو YouTube المتوفرة مجانًا والتي تغطي الموضوع. ما رأيي في هذه الموضوعات ليس خبيرًا ، ولكن من الأفضل النظر إليه على أنه ربما كيف يمكن للطالب الإجابة على الأسئلة في الاختبار. لمزيد من التفاصيل الحقيقية ، تحقق من المراجع الفعلية التي استخلصت منها لقطات الشاشة أدناه.

لذا فإن تفاعل البوليميراز المتسلسل هو تقنية لتضخيم كمية صغيرة من الحمض النووي إلى كميات كبيرة جدًا ، أحيانًا مثل مليار مرة. وهي تستخدم إنزيمات تسمى بوليميراز الحمض النووي ، والتي تم اكتشافها لأول مرة بشكل طبيعي في البكتيريا ، ويمكنها تجميع وحدات فرعية من الحمض النووي لمطابقة خيط أولي من الحمض النووي. لذلك يتم وضع العينة المراد تحليلها في أنبوب اختبار وخلطها مع قواعد الحمض النووي والبوليميراز والبادئة. التمهيدي عبارة عن عينة مفردة من الحمض النووي ، من حوالي 20-30 زوجًا قاعديًا ، والمعروف أنها العينة المتوقعة. إذا كانت العينة تحتوي فعليًا على مادة أولية في مكان ما في تسلسل الحمض النووي الأطول ، فإن تفاعل البوليميراز المتسلسل سيزيد عدد الجزيئات الموجودة في المليارات.

الإعداد الأولي لإجراء تحليل PCR (المصدر: https://www.youtube.com/watch؟

تتمثل الخطوة الأولى في عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في تسخين العينة لكسر روابط الهيدروجين بحيث تنفصل خيوط الحمض النووي إلى شريطين منفصلين. يمكنك أن ترى أن هذه الخطوة تستغرق حوالي 30 ثانية لفصل عينة الحمض النووي إلى شريطين.
المرحلة 1 من عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل - تغيير طبيعة روابط الهيدروجين (المصدر: https://www.youtube.com/watch؟

تتضمن الخطوة التالية تبريد العينة إلى حوالي 50-65 درجة مئوية حتى يتمكن البادرين من العثور على تسلسل الحمض النووي المطابق ومحاذاةهما بحيث تصبح العينة والبادئة مرتبطة بالهيدروجين. تستغرق هذه الخطوة حوالي 40 ثانية. يسمح اختيار البادئات للشخص باختيار جزء من الحمض النووي بين البادئين ليكون الجزء المختار من عينة الحمض النووي التي سيتم تضخيمها. هذا هو المكان الذي سترى فيه تأثيرات تكرار الحمض النووي بدءًا من 5 'نهاية إلى 3' يحدث. أنا لا أناقش أيًا من النسخ 5 مقابل 3 للحمض النووي ، ولكن يمكنك قراءة كل شيء عن خطوة النسخ المدهشة هذه في أي من الكتب المدرسية المشار إليها.

الخطوة 2 من عملية PCR - التلدين (المصدر: https://www.youtube.com/watch؟v=DH7o9Df5_50)

بعد ذلك يتم زيادة درجة الحرارة قليلاً حتى تتم عملية الاستطالة. يحدث هذا عند إضافة أزواج القواعد الأخرى إلى عينة الحمض النووي. هذه هي الخطوة الأولى من خطوات الازدواجية ، حيث كان هناك في يوم من الأيام خيط واحد من الحمض النووي والآن يوجد اثنان. لاحظ أن الحمض النووي الذي تقطعت به السبل الآن هو فقط ذلك الجزء من عينة الحمض النووي الذي كان يقع بين قسمي التمهيدي.
الخطوة 3 من عملية PCR - استطالة (المصدر: https://www.youtube.com/watch؟

لذلك ، هذه هي الأولى من العديد من الدورات الحرارية. يتم الآن تكرار كل دورة حرارية تلقائيًا عدة مرات للحصول على المقدار المطلوب من التضخيم.
كرر الدورة الحرارية عدة مرات لتضخيم الحمض النووي (المصدر: https://www.youtube.com/watch؟

لذلك نرى أنه في البداية كان هناك خيط واحد من الحمض النووي ، ثم هناك اثنان ، ثم أربعة وهكذا حتى نهاية التفاعل. توضح هذه الشريحة أنه بعد 20 دورة حرارية ، سنقوم بتضخيم العينة الأولية للحمض النووي بأكثر من مليون مرة. كل هذا يحدث في أكثر من ساعة بقليل.

/>
كرر الدورة الحرارية 20 مرة للحصول على مليون ضعف (المصدر: https://www.youtube.com/watch؟

لذلك ، بدأنا بعينة صغيرة من الحمض النووي وضربناها الآن بمليار مرة أو نحو ذلك. كيف حللنا النتيجة؟ ربما تعتمد التقنيات الجديدة اليوم بشكل أكبر على علامات الفلورسنت التي يتم إضافتها إلى العينة كجزء من عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل ، وبعد ذلك يمكنك فقط تسليط شعاع ليزر من خلال العينة المكبرة والحصول على قراءة سريعة جدًا لكمية الحمض النووي الموجودة. ولكن ، كان من المعتاد ، وربما لا يزال ، أن يتم وضع العينات المضخمة على شريحة مع هلام أجار ثم استخدام الرحلان الكهربائي لفصل وتحديد كمية الحمض النووي الموجودة. إذن كيف تعمل هذه العملية؟

في لقطة الشاشة التالية بواسطة جوزيف روس ، نرى كيف يتم ذلك. يستخدم مثالًا حيث تستخدم العينة الحمض النووي للأطفال والآباء ، ولكن الشيء الرئيسي الذي يجب أخذه في الاعتبار هو كيف يفصل الكهربائي الهلامي الحمض النووي عن طريق الوزن الجزيئي. توضع العينات في الآبار في الهلام ويتم تطبيق جهد كهربائي على شريط الاختبار. يعتبر الحمض النووي عادةً جزيءًا أكثر سلبية كهربيًا بحيث ينجذب أكثر إلى الطرف الكهربائي الموجب. لذلك تتحرك جزيئات الحمض النووي عبر الهلام ويتم فصلها بالوزن الجزيئي. تتحرك شرائح الحمض النووي الأصغر بشكل أسرع عبر الهلام. لذلك في نهاية الاختبار تحصل على عرض للحمض النووي بالوزن الجزيئي. تم أيضًا تضمين العديد من مسارات التحكم في شريط get. الأول هو مجرد عينة من الماء النقي وفي هذه الحالة لا ينبغي أن يكون هناك أشرطة مرئية من الحمض النووي لأنه لا يوجد أي منها في الماء النقي وإذا ظهرت بعض النطاقات ، فقد حدث بعض التلوث أثناء الاختبار. بالإضافة إلى ذلك ، تمت إضافة شريط من أربع كميات مخففة من مقاطع الحمض النووي القياسية بحيث يمكنك معرفة الوزن الجزيئي لأي شريط معين. هنا نرى الدقة بين نطاقات 100 و 250 و 500 و 1000 من وحدات الوزن الجزيئي للحمض النووي.

تحليل الرحلان الكهربائي للهلام لشرائح الحمض النووي (المصدر: جوزيف روس ، https://www.youtube.com/watch؟v=PXxtJlLpcTM)

هذه قصة موجزة عن كيفية استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لإجراء اختبار العينات. بعد ذلك ، دعنا نلقي نظرة على بعض النقاط الرئيسية التي ظهرت في دورة علم الفيروسات للدكتور فنسنت راكانييلو ، كولومبيا يو. ما زلت أحاول شق طريقي خلال هذه الدورة ، التي أصبحت الآن أكثر تعقيدًا وتجهد خلفيتي المحدودة في علم الأحياء الدقيقة . ومع ذلك ، فإنني أتذكر مرة أخرى التعقيد المذهل الذي يحدث في جميع الخلايا الحية وجميع التفاعلات الكيميائية الضرورية للحياة. مرة أخرى ، يمكنك الاطلاع على جميع محاضرات الدورة مجانًا على موقع YouTube على:
https://www.youtube.com/playlist؟list=PLGhmZX2NKiNldpyRUBBEzNoWL0Cso1jip&app=desktop

اختيار البادئات المستخدمة لتضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل لفيروس كورونا (المصدر: دبليو بيليني ، www.WHO.int)


لذا فإن فهم حجم القطرات والخصائص الفيزيائية للهواء المحيط يمكن أن يساعد في التنبؤ بالمسافة الآمنة لمنع العدوى. في هذه الدراسة المختبرية ، نرى أن درجة الحرارة والرطوبة يمكن أن تكون أيضًا من العوامل. تذكر أنه ليس الأمر أنه إذا سقط فيروس على جلدك فسوف تصاب بالعدوى. يجب أن يهبط الفيروس على خلية حية حتى يصيب الخلية وأيدينا والجلد الخارجي الآخر مصنوعان من خلايا ميتة. لذلك لا توجد عدوى ، لكننا نحتاج إلى غسل أيدينا حتى لا ننقل الفيروس إلى أعيننا أو أفواهنا أو رئتينا حيث تكون الخلايا الحية على اتصال مباشر.


ملاحظات دراسية حول رسم الخرائط الجزيئية | التكنولوجيا الحيوية

تقدم المقالة المذكورة أدناه ملاحظة دراسة حول رسم الخرائط الجزيئية.

دائمًا ما يكون إعداد خريطة الربط استنادًا إلى بيانات إعادة التركيب معاقًا بسبب عدم توفر الطفرات للعديد من الجينات. تم التغلب على هذا القيد إلى حد كبير في السنوات الأخيرة من خلال رسم الخرائط الجزيئية من خلال ISH (التهجين في الموقع) ، ورسم خرائط التقييد ، وتحليل RFLP (تعدد أشكال طول جزء التقييد) ، وتقنية RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) ، ودراسة السواتل الصغيرة والسواتل الدقيقة (VNTR). الخرائط الجزيئية هي فيزيائية وجينية.

الخريطة الفيزيائية الجزيئية:

(أ) التهجين الموقعي (ISH: FISH & amp GISH):

من أجل توطين ورسم خرائط لأجزاء مختلفة من الكروموسومات ومواقع الجينات على المستوى المجهري ، يتم الآن اعتماد تطبيق التهجين الجزيئي في الموقع على نطاق واسع (الشكل 22.13 أ).

يستخدم التهجين في الموقع (ISH) بشكل أساسي تسلسل المسبار ، الموسومة بالنظائر المشعة أو المركبات الفلورية (أو مراسل كيميائي). الخطوة الأولية هي تمسخ للهدف الذي يتبعه تهجين بمسبار التسلسلات التكميلية للخضوع لإعادة التلدين أو الاقتران.

ترتبط التسلسلات التكميلية للمسبار بشكل انتقائي في الموقع المستهدف. يتم توطين المواقع المهجنة إما من خلال التصوير الإشعاعي الذاتي أو التألق المناعي بالإضافة إلى تلطيخ مضاد مع بقع محددة تم اكتشافها خلويًا. تم تطوير تقنية التهجين في الموقع في البداية من قبل Pardue و Gall ثم لاحقًا modi & shyfied بواسطة مؤلفين مختلفين.

التهجين الفلوري في الموقع (FISH) هو أقوى تقنية في الوقت الحاضر ، والتي من خلالها يتم تهجين المواقع المستهدفة في الكروموسوم مع تسلسل مسبار كومبليمين و shytary ، موسوم بمركب فلورسنت. هناك طريقتان ، مباشرة أو غير مباشرة ، لتقنية FISH في كروموسوم النبات.

في الطريقة غير المباشرة ، يتم تمييز المجسات بجزيء المراسل ، مثل البيوتين والديجوكسيجينين وأخيراً يتم تحديد موقعها بواسطة الأجسام المضادة المترافقة مع الفلوروكروم مثل أفيدين. المبدأ الرئيسي لهذه الطريقة هو جعل تسلسل الهدف المجس كمستضد بحيث يمكن اكتشافه من خلال الجسم المضاد.

الفلوروكروميات الشائعة هي FITC (فلورسين-إيزوثيوسيانات) وكذلك رودامين. في الطريقة المباشرة ، يتم تمييز المسبار مباشرة بواسطة الأجسام المضادة التي تحمل علامة الفلوروكروم. إن وضع العلامات المباشرة على الفلوروكروم بالمسبار هو الطريقة السريعة لضمان الدقة الجيدة.

بسبب عدم وجود علامات karyomorphological ، فإن تحليل كروموسوم الطور الطوري لا يمكن أن يميز جينومات الوالدين في الهجينة. إذا تم تطبيق تقنية ISH مع مجسات الجينوم الكلية حيث يكون للنبات دستور متعدد الجينوم ، يمكن تحديد كروموسوم الوالدين مباشرة في الهجينة ، مثل Triticum و Secale في Triticale أو في هجين Gasteria و Aloe (الشكل 22.13 ب) .

وهكذا فإن طريقة تهجين الجينوم الكلي في الموقع تسمى بطريقة أخرى تقنية GISH (التهجين الجيني في الموقع). منذ عرضه الأول في تحديد الجينوم الأبوي في الهجين بين Hordeum chilense و Secale africanum بواسطة Schwarzacher et al. ، تم تطبيق هذه التقنية على نطاق واسع لتوضيح أسلاف الهجينة والمتعددة الصبغيات.

يظل GISH أداة فعالة للغاية في تحديد الجينوم ، وتوجيههم وفي إقامة العلاقات الجينية بين الأنواع. يساعد استخدام GISH في الانقسام الاختزالي في فهم التماثلات بين الجينوم وكذلك في توضيح النقل المحتمل لشرائح الكروموسوم من خلال إعادة التركيب بين الجينوم.

يتم الآن تطبيق تقنية FISH ، باستخدام مجموعات ألوان مختلفة بواسطة مجسات مختلفة ، لاكتشاف جينومات مختلفة في وقت واحد ، أو مقاطع كروموسوم من خلال امتداد التقنية - والتي يطلق عليها بطريقة أخرى FISH متعدد الألوان. تم استخدام هذه الطريقة لتمييز ثلاثة جينومات في القمح سداسي الصبغيات وللكشف عن العديد من مواقع التحويل والتوطين في الأنواع متعددة الصيغ الصبغية من Triticum و Aegilops.

تعتبر تقنية FISH متعددة الألوان الآن أداة قوية لرسم خرائط الجينات وكذلك الكشف عن التشوهات ، بما في ذلك نقاط الإدخال والكسر مع تحقيقات مشتتة محددة الكروموسوم أو محددة الجينوم. يستخدم مصطلح طلاء الكروموسوم في FISH tech & shynique حيث يتم استخدام مجسات مشتتة محددة للكروموسوم لاكتشاف موقع تسلسل الهدف التكميلي في التكملة.

تم تعديل تقنية FISH في السنوات الأخيرة لتحديد موقع تسلسل نسخة مفردة أو ترادفية ، باستخدام التمديد والتضخيم بوساطة التمهيدي في الموقع بواسطة طريقة PCR. يكمن تطبيق هذه الطريقة أيضًا في تأكيد موقع الجين الأجنبي على مستوى الكروموسوم في الأفراد المعدلين وراثيًا.

(ب) تعيين القيود:

يتم تحديد تسلسل النوكليوتيدات للجين عن طريق انقسام الحمض النووي المقابل في مواقع محددة بمساعدة نوكليازات التقييد. يمكن تحديد مواقع الانقسام هذه وتعيينها لإعطاء خريطة التقييد.

على خريطة التقييد ، تم العثور على تسلسل خطي للمواقع ، لكل منها إنزيم معين والمسافات بينها تقاس بعدد أزواج القاعدة من الحمض النووي (الشكل 22.14). يمكن استخدام بيانات هضم جزيء DNA بواسطة أكثر من نوكلياز واحد لترتيب مواقع الكسر بترتيب محدد.

تتضمن هذه العملية هضمًا مزدوجًا (إنزيم A و B) لتحديد مواضع انشقاق الحمض النووي بسبب إنزيم واحد فيما يتعلق بإنزيم آخر. تظهر نتائج الهضم المتبادل (A متبوعًا بـ B و B متبوعًا بـ A) نفس الأجزاء.

يتم أيضًا هضم عينة الحمض النووي الأصلية بمزيج من كلا الإنزيمات لتأكيد نتائج الهضم المتتالي الفردي. يمكن اكتشاف منطقة متداخلة لمختلف الملخصات (A و B) مما يسمح بإعداد خريطة التقييد.

الأساليب التالية تستخدم أيضًا لهذا الغرض.

إنها تقنية يتم فيها تحديد النسخ المتسلسلة المختلفة من مكتبة الجينوم عن طريق التهجين المتتالي ويتم إعداد خرائط التقييد بشكل منفصل. نتيجة لذلك ، تتميز مناطق الكروموسومات بأكملها ويمكن إعداد خريطة التقييد والتشكيل للكروموسوم بأكمله باتباع تقنية المشي الكروموسومي.

(2) القفز الكروموسوم:

يتم استخدام نهج قفز الكروموسوم لبناء خريطة فيزي آند شيكال من أجل تقريب العلامة الجزيئية من الجين المعني. ستعمل هذه التقنية على تقليل حجم مقاطع الحمض النووي التي تحمل الجين المراد استنساخه مقارنة بالواسم الجزيئي المرتبط المستخدم.

(3) رسم الخرائط الهجين الإشعاعي:

الهجينة الإشعاعية هي خلايا هجينة جسدية يتم فيها دمج جزء مشع من الحمض النووي البشري بشكل عشوائي في كروموسومات القوارض. بعد فحص لوحة من الحيوانات المستنسخة الهجينة بعلامة بشرية تسمح للعلامة أن يتم تعيينها.

يمكن تعريف QTL (موقع السمات الكمية) على أنها منطقة من الجينوم مرتبطة بسمة زراعية كمية مهمة. تعد خريطة QTL & shyping طريقة متقدمة باستخدام خرائط RFLP.

يستغل خرائط الربط الكاملة عن طريق تعيين الفاصل الزمني لـ & # 8216QTL & # 8217 ويحدد التقاطعات لرسم خرائط QTL. يتم تقييم تأثير كل جزء من الجينوم الموجود بين زوج من مواقع العلامات (ولكن ليس QTL المرتبط بـ RFLP واحد) عن طريق رسم الخرائط الفاصلة.

الخريطة الجينية الجزيئية:

تم إعداد هذه الخرائط باستخدام العلامات الجزيئية التالية:

(أ) تعدد الأشكال لطول جزء التقييد (RFLP):

عندما يتم هضم الحمض النووي الجيني من عدة أفراد (مرتبطون وراثيًا) بنفس إنزيمات التقييد وفصلهم على مادة هلامية من خلال الرحلان الكهربي ، ونقشها وتهجينها باستنساخ الحمض النووي المرتبط بتسلسل معروف ، يكشف تعدد الأشكال في نمط التهجين عن العلاقة بين الأفراد المختلفين ، وهذا الاختلاف يُطلق عليه & # 8216 تعدد الأشكال لطول جزء الاحتكاك & # 8217 (RFLP) (الشكل 22.15).

يستخدم RFLP لاستنتاج علاقة النشوء والتطور في كل من النباتات والحيوانات. تُستخدم هذه التقنية واللمعان أيضًا لإعداد خرائط كروموسوم في الإنسان أو الفئران أو ذبابة الفاكهة أو في نباتات مثل الذرة والطماطم والخس والأرز. يمكن أيضًا دراسة علاقة الوراثة أو الارتباط بالخجل من خلال هذه التقنية لتحليل الوالد ، F1 و F2 تعداد السكان.

(ب) الحمض النووي العشوائي متعدد الأشكال (RAPD):

إذا تم استخدام مواد أولية مركبة بشكل مصطنع مع تسلسل تعسفي لتضخيم وتضخم PCR (تفاعل البوليميراز المتسلسل) ، فسيتم اختيار شرائح الحمض النووي التي سيتم تضخيمها عشوائيًا والتي ستوفر عينة عشوائية حقيقية من علامات الحمض النووي ، والتي توصف بـ & # 8216 Random Amplified polymorphic DNA & # 8217 (RAPD).

الخطوات المتبعة هي:

(ط) تضخيم الحمض النووي المستخرج بواسطة PCR باستخدام الاشعال العشوائي.

(2) فصل الحمض النووي المضخم على هلام الاغاروز.

(3) تصور العلامات على الجل والتصوير الفوتوغرافي لها.

(ج) تعدد الأشكال المتضخم لشظية الطول (AFLP):

تتضمن هذه التقنية ربط المحولات بشظايا الحمض النووي التي تم الحصول عليها بعد هضم الطاقة المتجددة. ثم يتم السماح بهذه الأجزاء لـ PCR. البادئات المستخدمة هنا هي تسلسل الجينات والتسلسل المحولات التي تساعد على تضخيم الطول الكامل بين موقعي التقييد. ثم يتم فصل أطوال الأجزاء المختلفة على مادة هلامية.

(د) SCAR (أحرف التسلسل والمنطقة المضخمة المقطوعة):

يتم استنساخ منتجات RAPD المضخمة ، وتسلسلها ، ويتم التأكد من تسلسل التمهيدي من نهاية النطاق ، وتكون البادئات عمومًا أطول مما يعطي درجة أكبر من الخصوصية.

(هـ) عدد متغير التكرارات الترادفية (VNTR):

يمكن الكشف عن اختلافات الحمض النووي بين شخصين من خلال عدد متغير من التكرارات الترادفية وهي عبارة عن تسلسلات مكررة قصيرة مرتبة بالترتيب الترادفي. تنقسم VNTR إلى مجموعتين Minisatellites (10-25 bps) و Microsatellites (1-5 bps). يمكن لمسبار متعدد النواة للحمض النووي لمثل هذه السواتل الصغيرة أو الصغيرة أن يكتشف في وقت واحد عددًا كبيرًا من المواقع المتغيرة التي تحتوي على تسلسل تكرار الحمض النووي الترادفي.

(و) مواقع ذات علامات التسلسل (STS):

المواقع الموسومة بالتسلسل هي طول الحمض النووي من 100-500 نقطة أساس وهي فريدة من نوعها في الجينوم. يتم إنشاؤها عن طريق تضخيم تفاعل البلمرة المتسلسل للبادئات التي تم الحصول عليها عن طريق تسلسل أجزاء من الجينوم.

(ز) تعدد أشكال النوكليوتيدات الفردي (SNP):

يمكن أيضًا تمييز الخريطة في الاختلافات بين الأفراد التي تصل إلى حد التغييرات في أزواج أساسية واحدة. تسمى هذه الاختلافات SNPs.


لماذا يعتبر تفاعل البوليميراز المتسلسل مفيدًا؟

بمجرد تضخيمها ، يمكن استخدام منتجات PCR في العديد من الإجراءات المختبرية المختلفة على سبيل المثال ، اعتمدت معظم تقنيات رسم الخرائط في مشروع الجينوم البشري على تفاعل البوليميراز المتسلسل كخطوة في العملية.

يعتبر تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) مفيدًا أيضًا في عدد من التقنيات المختبرية والسريرية الناشئة حديثًا ، بما في ذلك بصمة الحمض النووي ، واكتشاف البكتيريا أو الفيروسات (خاصة الإيدز) ، وتشخيص الاضطرابات الوراثية وإعداد عينات لاختبار الحمض النووي للأنساب.

انقر هنا للحصول على صحيفة وقائع تفاعل البوليميراز المتسلسل من المعهد الوطني للجينوم البشري


علم الأحياء العام في BCC

ال تفاعل البلمرة المتسلسل ( PCR ) هي طريقة لتضخيم أو نسخ منطقة من الحمض النووي في أنبوب بسرعة. كما يوحي الاسم ، تستخدم التقنية صامدًا للحرارة بوليميريز الحمض النووي إنزيم لتقليد ما يحدث داخل الخلية أثناء تكرار الحمض النووي في الأنبوب. يسمح لنا التفاعل المتسلسل بنسخ الحمض النووي بسرعة من مادة مصدر دقيقة للغاية بطريقة أسية. تستخدم هذه التقنية في علم الطب الشرعي والاختبارات الجينية واستنساخ الجينات النادرة. بسبب عملية النسخ الأسي ، يمكن لخلية شاردة تُترك وراءها أن توفر ما يكفي من المادة الجينية لعمل بلايين من النسخ من هذا الحمض النووي. يمكن ملاحظة عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل في رسم متحرك موجود في موقع Cold Spring Harbor & # 8217s DNA Learning Center
(http://www.dnalc.org/resources/3d/19-polymerase-chain-reaction.html).

البادئات هي مكملة عكسية لواحد من خيطي الحمض النووي. إنها تحيط بمنطقة الاهتمام وتصبح مدمجة في المنتج المكرر.

كما هو الحال مع أي عملية نسخ DNA ، يحتاج المرء أن يبدأ بـ a نموذج . القالب هو مصدر المواد المخصصة للنسخ. في هذه العملية ، لا يهتم العلماء بنسخ الجينوم بأكمله ، فقط جزء صغير من الاهتمام. تتطلب بوليمرات الدنا مواد أولية لبدء عملية البلمرة. الاشعال تم تصميمها على أنها قطاعات صغيرة قليلة النوكليوتيد تحيط بها موضع الاهتمام. هذه خيوط قصيرة من الحمض النووي التي تعكس التكملة العكسية لمنطقة الحمض النووي ذات الأهمية بحيث يكون لبوليميراز الحمض النووي نقطة انطلاق ويتم توجيهه فقط إلى جزء الحمض النووي محل الاهتمام. تميل هذه البادئات إلى أن تكون حوالي 18-24 قاعدة طويلة.
ومع ذلك ، فإن جزيء الحمض النووي المزدوج الذي تقطعت به السبل هو بالفعل قاعدة مقترنة معًا في حلزون مزدوج بحيث لا يمكن أن تتفاعل البادئات لدينا. تتمثل الخطوة الأولى في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في فصل جزيء الحمض النووي المزدوج الشريطة بواسطة تغيير الطبيعة روابط H باستخدام حرارة عالية (95 درجة مئوية). تركيزات التمهيدي أعلى بكثير من القالب الأصلي. الخطوة التالية من PCR تسمى التلدين . خلال هذه الخطوة ، تنخفض درجة الحرارة إلى حوالي 55 درجة مئوية ، ولا تزال درجة الحرارة هذه ساخنة وفقًا لمعاييرنا ، ولكنها ضرورية لتعزيز صرامة الاقتران الصحيح للقاعدة من البادئات مع أهدافها في القالب. يُشتق بوليميراز الحمض النووي المستخدم في هذه العملية من بكتيريا تعيش في درجات حرارة عالية جدًا ولا تفسد طبيعة البروتينات الأخرى في مثل هذه الظروف (قابلة للحرارة). تم عزل الإنزيم الأصلي من كائن حي يسمى Thermus aquaticusلذلك نسمي إنزيم Taq polymerase أو فقط طق لفترة قصيرة. تعيش هذه البكتيريا في الينابيع الساخنة حيث تصل درجات الحرارة إلى حوالي 50 درجة مئوية ولكنها تعيش في نطاق يتراوح بين 50-80 درجة مئوية. يتم رفع درجة الحرارة مرة أخرى إلى درجة حرارة أعلى من 72 درجة مئوية للبوليميراز ه اكستيند (وتسمى أيضا استطالة ) أو تابع خطوة البلمرة من التمهيدي.
يوجد داخل هذا الأنبوب جميع مكونات البوليميراز للعمل بشكل مناسب بما في ذلك المخزن المؤقت للحفاظ على الرقم الهيدروجيني ، والكاتيونات ثنائية التكافؤ مثل Mg 2+ ، والبادئات وتزويد مونومرات النيوكليوتيد - dNTPs أو ديوكسينوكليوزيد ثلاثي الفوسفات (dATP ، dCTP ، dTTP ، dGTP).

يتم إنجاز تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عن طريق التدوير السريع بين هذه الخطوات الثلاث: إفساد الطبيعة ، الصلب ، التمديد. خطوة تحديد المعدل هي الامتداد الذي يحد من طول الحمض النووي المراد نسخه. إذا كان النموذج الأصلي عبارة عن نسخة واحدة فقط ، فبعد الانتهاء من الدورة ، سيكون لدينا نسختان. سيكون للدورة اللاحقة 4 نسخ ، ثم 8 ، ثم 16 ، و 32 ، وهكذا. تعد عملية المضاعفة أسية ، لذا من نسخة واحدة تمر 30 دورة ، سيكون لدينا 2 30 أو 1،073،741،824 نسخة. هذا أكثر من مليار نسخة في بضع ساعات من الزمن.

الطبيعة الأسية لـ PCR


كيف يتم استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل لتضخيم الحمض النووي؟

يمكن قراءة الكثير من التفاصيل الأكثر إثارة للاهتمام هنا. أيضًا ، ما الذي يتحكم في الحمض النووي الذي يتم تضخيمه في تفاعل البوليميراز المتسلسل؟

PCR الاشعال مثل الآخرين الحمض النووي بوليميراز ، يمكن أن يصنع بوليميراز Taq فقط الحمض النووي إذا أعطيت مادة أولية ، فإن سلسلة قصيرة من النيوكليوتيدات توفر نقطة انطلاق لـ الحمض النووي نتيجة الجمع بين الطريحة والنقيضة. في PCR رد فعل ، المجرب يحدد منطقة الحمض النووي التي سيتم نسخها ، أو تضخيم، من خلال الاشعال التي يختارها هو أو هي.

بعد ذلك ، السؤال هو ، لماذا يعد تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل مهمًا؟ ال تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) هو الأهمية أداة للعديد من التطبيقات. على سبيل المثال ، يمكن استخدامه ل يضخم، يوسع، يبالغ عينة من الحمض النووي عندما لا يكون هناك ما يكفي لتحليلها (على سبيل المثال ، عينة من الحمض النووي من مسرح الجريمة ، والعينات الأثرية) ، كطريقة لتحديد الجين محل الاهتمام ، أو لاختبار المرض.

تعرف أيضًا ، ما هو الشكل الكامل لـ PCR وكيف يتم تضخيم الحمض النووي باستخدام PCR؟

PCR تعني تفاعل البلمرة المتسلسل، وهي تقنية بيولوجيا جزيئية لتضخيم أجزاء من الحمض النووي ، عن طريق توليد نسخ متعددة باستخدام إنزيمات بوليميريز الحمض النووي تحت ظروف خاضعة للرقابة.

لماذا يستخدم تفاعل البوليميراز المتسلسل في عملية تسلسل الحمض النووي؟

PCR تمثل تفاعل البلمرة المتسلسل، وباختصار ، يتم نسخها الحمض النووي ملايين المرات بسرعة كبيرة. إنها تستخدم في تسلسل الحمض النووي لأنه في بعض الأحيان الحمض النووي العينة صغيرة جدًا. يحدث هذا ، على سبيل المثال ، في أدلة مسرح الجريمة ، أو في عينات قديمة جدًا (على سبيل المثال.


كيف يتم اختيار شرائح الحمض النووي في PCR؟ - مادة الاحياء

يمكن استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لتوليد أجزاء DNA بسرعة للاستنساخ ، بشرط وجود مصدر مناسب لقالب الحمض النووي وأن معلومات التسلسل الكافية معروفة للسماح بتصميم مواد أولية خاصة بالأمبليكون المطلوب. على عكس الاستنساخ التقليدي ، يوفر PCR القدرة على استنساخ أجزاء الحمض النووي بسهولة والتي قد تكون منخفضة الوفرة في عينة معقدة مثل الحمض النووي الجيني ، أو cDNAs التي تتوافق مع نسخ mRNA النادرة. يمكن هضم منتجات PCR وربطها بالوسائل التقليدية ، أو ربطها مباشرة (نهايات حادة أو نهايات TA) ، أو استخدامها في الاستنساخ المستقل للربط (LIC) أو تطبيقات الاستنساخ غير الملحومة ، مثل Gibson Assembly & reg أو NEBuilder HIFI DNA Assembly (NEBuilderHiFi.com).

خلال تفاعل البوليميراز المتسلسل النموذجي ، يتم خلط قالب الحمض النووي (الذي يحتوي على منطقة الاهتمام) مع ديوكسينوكليوتيدات (dNTPs) وبوليميراز الحمض النووي والبادئات. الاشعال عبارة عن شرائح قصيرة من الحمض النووي التكميلي الذي يتزاوج مع قالب الحمض النووي ، في أعلى منطقة الاهتمام ، ويعمل كمواقع توظيف للبوليميراز. يتضمن تفاعل البوليميراز المتسلسل سلسلة من دورات درجة الحرارة التي يتم التحكم فيها تلقائيًا عن طريق استخدام جهاز تدوير حراري يتحكم بدقة في درجة حرارة التفاعل ومدة كل خطوة درجة حرارة ، مما يضمن تضخيمًا فعالًا (لمزيد من التفاصيل حول PCR ، انظر تضخيم الحمض النووي).

لتفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الروتينية القوية واحدطق بوليميراز DNA هو الخيار الأكثر شيوعًا للإنزيم. يترك هذا البوليميراز في الغالب الأدينينات المفردة المستقلة عن القالب (A) في النهاية 3 & rsquo لمنتج PCR. من أجل PCR عالي الدقة ، يجب استخدام بوليميريز DNA المدقق. هذه الإنزيمات لا تخلق قاعدة مفردة متدلية ، تاركة نهايات غير حادة. يعتبر النظر في نهايات منتجات PCR ، بما في ذلك حالة الفسفرة ، أمرًا مهمًا لاستراتيجيات الاستنساخ اللاحقة (انظر التعديل النهائي). عندما تشتمل البادئات PCR على مواقع إنزيم تقييد ، يمكن هضم منتجات PCR وربطها بالوسائل التقليدية.

يمكن أيضًا إنتاج جزيئات ناقلات للاستنساخ بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل. تسمح مواقع التقييد المتضمنة في البادئات بتوليد نهايات لزجة (خيوط مفردة متدلية) لتسهيل استنساخ شظايا التقييد. خلاف ذلك ، يمكن إنتاج متجه غير حاد الأطراف بواسطة PCR باستخدام بوليميراز تدقيق عالي الدقة أو عن طريق تخفيف القاعدة المفردة 3 و rsquo المتراكمة التي تنتجها طق بوليميراز. يسمح النسخ العكسي للحمض النووي الريبي إلى الحمض النووي التكميلي الأول (cDNA) متبوعًا بـ PCR (RT-PCR) باستنساخ جزيئات الحمض النووي المزدوجة التي تقطعت بهم السبل والتي تتوافق مع نصوص الجينات (بالنسبة إلى mRNA ، انظر تخليق cDNA).

اختر النوع:

مقالات

اقرأ عن العلاقة بين بنية ووظيفة البوليميراز عند نسخ الحمض النووي.


التكنولوجيا الحيوية هو استخدام التكنولوجيا لتغيير التركيب الجيني للكائنات الحية للأغراض البشرية. بشكل عام ، الغرض من التكنولوجيا الحيوية هو إنشاء كائنات مفيدة للإنسان أو لعلاج الاضطرابات الوراثية. على سبيل المثال ، يمكن استخدام التكنولوجيا الحيوية لإنشاء محاصيل تقاوم الآفات الحشرية أو تنتج المزيد من الغذاء ، أو لابتكار علاجات جديدة للأمراض البشرية.

التكنولوجيا الحيوية: الثورة الخفية يمكن رؤيتها على http://www.youtube.com/watch؟v=OcG9q9cPqm4.

ما علاقة التكنولوجيا الحيوية بي؟ تمت مناقشته في الفيديو التالي: http: //www.youtube.com/watch؟ v = rrT5BT_7HdI (10:01).

تستخدم التكنولوجيا الحيوية مجموعة متنوعة من التقنيات لتحقيق أهدافها. تقنيتان شائعتان هما الاستنساخ الجيني وتفاعل البوليميراز المتسلسل.

استنساخ الجينات

استنساخ الجينات هي عملية عزل الجين وعمل نسخ منه. هذا مفيد للعديد من الأغراض. For example, gene cloning might be used to isolate and make copies of a normal gene for gene therapy. Gene cloning involves four steps: isolation, ligation, transformation, and selection. You can watch an interactive animation about gene cloning at this link:http://www.teachersdomain.org/asset/. int_geneclone/.

  1. In isolation, an enzyme (called a restriction enzyme) is used to break DNA at a specific base sequence. This is done to isolate a gene.
  2. خلال ربط, the enzyme ligase DNA combines the isolated gene with plasmid DNAfrom bacteria. (أ بلازميد is circular DNA that is not part of a chromosome and can replicate independently.) Ligation is illustrated in شكلأدناه. The DNA that results is called الحمض النووي معاد التركيب.
  3. في تحويل, the recombinant DNA is inserted into a living cell, usually a bacterial cell. Changing an organism in this way is also called الهندسة الوراثية.
  4. Selection involves growing transformed bacteria to make sure they have the recombinant DNA. This is a necessary step because transformation is not always successful. Only bacteria that contain the recombinant DNA are selected for further use.

Ligation. DNA ligase joins together an isolated gene and plasmid DNA. This produces recombinant DNA.

The experiments of Stanley Cohen and Herbert Boyer, pioneers of genetic engineering, are explained in the video at https://www.youtube.com/watch?v=nfC689ElUVk. More on these pioneers can be found at http://www.dnalc.org/view/16033-Stanley-Cohen-and-Herbert-Boyer-1972.html.

تفاعل البلمرة المتسلسل

ال polymerase chain reaction (PCR) makes many copies of a gene or other DNA segment. This might be done in order to make large quantities of a gene for genetic testing. PCR involves three steps: تغيير الطبيعة, annealing، و تمديد. The three steps are illustrated in شكل أدناه. They are repeated many times in a cycle to make large quantities of the gene. You can watch animations of PCR at these links:

  1. Denaturing involves heating DNA to break the bonds holding together the two DNA strands. This yields two single strands of DNA.
  2. Annealing involves cooling the single strands of DNA and mixing them with short DNA segments called primers. Primers have base sequences that are complementary to segments of the single DNA strands. As a result, bonds form between the DNA strands and primers.
  3. Extension occurs when an enzyme (Taq polymerase or Taq DNA polymerase) adds nucleotides to the primers. This produces new DNA molecules, each incorporating one of the original DNA strands.

The Polymerase Chain Reaction. The polymerase chain reaction involves three steps. High temperatures are needed for the process to work. The enzyme Taq polymerase is used in step 3 because it can withstand high temperatures.


أنواع PCR

  1. الوقت الحقيقي PCR
  2. PCR في الوقت الحقيقي الكمي (Q-RT PCR)
  3. PCR النسخ العكسي (RT-PCR)
  4. Multiplex PCR
  5. متداخلة PCR
  6. بعيد المدى PCR
  7. PCR أحادي الخلية
  8. PCR سريع الدوران
  9. PCR الخاص بالميثيلة (MSP)
  10. بدء التشغيل السريع PCR
  11. عالية الدقة PCR
  12. في الموقع PCR
  13. عدد متغير من التكرارات الترادفية (VNTR) PCR
  14. PCR غير متماثل
  15. تكرار PCR القائم على التسلسل
  16. تمديد تداخل PCR
  17. تجميع PCR
  18. تفاعل البوليميراز المتسلسل المحدد (ISSR)
  19. PCR بوساطة الربط
  20. مثيلة - محدد PCR
  21. Miniprimer PCR
  22. المرحلة الصلبة PCR
  23. المس PCR ، وما إلى ذلك

The PCR method

PCR is used to amplify a specific region of DNA in order to produce a large number of nearly identical copies. The method uses a heatstable DNA replication enzyme called a DNA polymerase, the four deoxynucleotide building blocks of DNA and two small single-stranded DNA segments called primers, which flank the “target” region of DNA to be amplified and are complementary to each strand (meaning the matching strand to which its bases pair).

There are 3 basic steps in PCR that are carried out at different temperatures to create conditions optimal for:

  1. DNA denaturation (meaning to separate the double-stranded DNA into single strands).
  2. Primer binding or hybridization to each of the single strands of DNA at either the beginning or the end of the target sequence, depending upon the single-strand of DNA. Hybridization combines complementary, single-stranded DNA into a single molecule. This process is called annealing.
  3. DNA polymerase elongation. The enzyme attaches to the primer-single-stranded DNA duplex and synthesizes the complementary strand of DNA, using the existing single-strand as a template.

Newly synthesized DNA strands can serve as additional template for complementary strand synthesis. PCR rapidly amplifies DNA because both strands are copied, there is an exponential increase in the number of copies. Assuming there is only a single copy of the target gene before cycling starts:

Cycle 35 68.7 billion copies (2 36 )

After 35 cycles of PCR, there will be over 68 billion copies! In reality, PCR starts with many copies of the target gene, so the end result is typically higher. Each cycle only takes a few minutes. Factoring in the time to change temperatures, the entire process can be done in several hours.

More recently, a new method of PCR quantification called real-time PCR or quantitative real-time PCR (qRT-PCR) was developed [4]. qRT-PCR enables the detection and quantification of a specific DNA sequence using a fluorescent reporter (either a dye or a modified DNA oligonucleotide probe), which increases in direct proportion to the amount of DNA amplified in a reaction.

It’s easier to understand how PCR works with pictures. Visit DNA Interactive to view an animation of PCR. DNA Interactive is an award-winning educational web site created in 2003 to celebrate the 50th anniversary of the discovery of the DNA double helix structure.

The advent of PCR and recombinant DNA technologies have enabled numerous applications in basic and clinical research. PCR is often regarded as one of the most important scientific advances in molecular biology. Indeed, Kary Mullis holds the only Nobel Prize ever awarded to a scientist in the biotechnology industry. He received the Nobel Prize for Chemistry in 1993.


شاهد الفيديو: 215 عرض شرائح مخصص (أغسطس 2022).