معلومة

معمل 4: تعداد الكائنات الدقيقة - علم الأحياء

معمل 4: تعداد الكائنات الدقيقة - علم الأحياء



We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

المعمل 4: تعداد الكائنات الدقيقة

تعريفات:

تحليل كمي
التحليل حيث يتم تحديد عدد الميكروبات

التحليل النوعي
التحليل حيث يتم تحديد وجود أو عدم وجود كائن حي

CFUs
مستعمرة

شهادة توثيق البرامج
شهادة تحليل

هذا الجزء هو عينة تمثيلية وسيقدم نتيجة دقيقة وشاملة.

عند الإبلاغ عن نتيجة حيث لم يتم اكتشاف كائنات حية ، يفرض معيار الإبلاغ أنه لا يمكنك الإبلاغ عن الصفر ، ولكن عليك الإبلاغ & lt1.

نظرًا لأنه يتم تخفيف العينات لأغراض الاختبار ، يجب أيضًا أخذ هذا التخفيف في الاعتبار عند الإبلاغ عن النتيجة. على سبيل المثال ، في حالة عدم اكتشاف مستعمرات في التخفيف بنسبة 1:10 ، فإن النتيجة تساوي & lt10.

هذه النتيجة هي أقل نتيجة يتم الإبلاغ عنها حيث لم يتم الكشف عن كائنات حية.

راجع المستخلص من ISO 7218 ، "علم الأحياء الدقيقة للمواد الغذائية وعلف الحيوانات - القواعد العامة للفحوصات الميكروبيولوجية":

"9.3.5.3.2 إذا كان الطبقان على مستوى عينة الاختبار (المنتجات السائلة) أو المعلق الأولي (المنتجات الأخرى) لا يحتويان على أي مستعمرات ، فعبّر عن النتيجة على النحو التالي:
أقل من كائن حي دقيق واحد لكل مليلتر (منتجات سائلة)
أقل من 1 / د من الكائنات الحية الدقيقة لكل جرام (منتجات أخرى)
(حيث d هو عامل التخفيف للتعليق الأولي) "

تشير هذه النتائج إلى أن عدد الميكروبات وصل إلى النطاق الأعلى القابل للعد في طريقة الاختبار. الأعداد هي TNTC (أكثر من اللازم للعد) وبالتالي يتم الإبلاغ عنها على أنها أكثر من (& GT) النطاق القابل للعد الأعلى للاختبار.

عندما تتجاوز الأعداد النطاق القابل للعد الموصى به ، ولكن يمكن عدها ، سيتم الإبلاغ عن النتيجة بـ "E" للإشارة إلى أن العدد خارج النطاق القابل للعد الموصى به.

تم تحديد شكل الإبلاغ عن النتائج وفقًا لمعيار ISO 7218 ، "علم الأحياء الدقيقة للمواد الغذائية وعلف الحيوانات - القواعد العامة للفحوصات الميكروبيولوجية".

يفرض هذا المعيار ما يلي:
في العينات السائلة ، يكون الحد الأدنى للكشف عن غياب النمو هو & lt1.

نظرًا لأنه يتم إجراء تخفيف للمواد الغذائية الصلبة من أجل اختبار العينة ، فإن الحد الأدنى للكشف عن غياب النمو هو & lt10.

نظرًا لتحليل جزء تمثيلي من العينة ، تشير النتائج إلى أنه لم يتم الحصول على نمو في جزء العينة الذي تم اختباره.
وبالتالي فإن نتيجة "عدم النمو" أو "الصفر" ليست دقيقة علميًا لأنه لم يتم الإبلاغ عن تخفيف العينة أو أخذها في الاعتبار.

"E" = مقدر
تحتوي معظم الأساليب المرجعية الكمية على مجموعة موصى بها من النتائج التي يمكن الإبلاغ عنها. عندما يتم الإبلاغ عن أعداد خارج هذا النطاق ، يشار إليها باستخدام الرمز "E". يمثل هذا العدد المستعمرات الفعلية التي تم عدها حيث يكون العد النهائي خارج نطاق التقارير الموصى به.

مثال:
النطاق القابل للعد لـ TVC (إجمالي العدد القابل للتطبيق) هو 30-300 CFUs / جم لكل تخفيف. ستقرأ النتائج الواردة في شهادة توثيق البرامج على النحو التالي بالنسبة للتهم التالية:
متوسط ​​عدد CFU = 10 - النتائج = 10 E.
متوسط ​​عدد CFU = 350 - النتائج = 350 إي
(لسهولة التفسير ، لم يتم تضمين أي عامل تخفيف في المثال أعلاه)

يرجى ملاحظة أننا أبلغنا عن جميع نتائجنا وفقًا للمعيار الدولي ، ISO 7218 ، "علم الأحياء الدقيقة للمواد الغذائية وعلف الحيوانات - القواعد العامة للفحوصات الميكروبيولوجية".

يرجى الرجوع إلى النقطة 9.3.5.3.1 و 9.3.5.3.2 ، حيث يتم ذكر ما يلي فيما يتعلق بحساب النتائج والإبلاغ عنها (انظر أدناه):

"9.3.5 التعبير عن النتائج
9.3.5.3 الأعداد المقدرة
9.3.5.3.1 إذا كان الطبقان ، على مستوى عينة الاختبار (المنتجات السائلة) أو التعليق الأولي (المنتجات الأخرى) ، يحتويان على أقل من 15 مستعمرة ، فاحسب المتوسط ​​الحسابي y للمستعمرات المحسوبة على طبقين.
عبر عن النتيجة كما يلي:
بالنسبة للمنتجات السائلة: العدد التقديري للكائنات الدقيقة في المليلتر NE = y
بالنسبة للمنتجات الأخرى: العدد التقديري للكائنات الحية الدقيقة لكل جرام NE = y / d
(حيث d هو عامل التخفيف للتعليق الأولي).

9.3.5.3.2 إذا كان الطبقان على مستوى عينة الاختبار (المنتجات السائلة) أو المعلق الأولي (المنتجات الأخرى) لا يحتويان على أي مستعمرات ، فعبّر عن النتيجة على النحو التالي:
أقل من كائن حي دقيق واحد لكل مليلتر (منتجات سائلة)
أقل من 1 / د من الكائنات الحية الدقيقة لكل جرام (منتجات أخرى)
(حيث d هو عامل التخفيف للتعليق الأولي).

النتائج الأولية تشير إلى تحليلات كاملة. قد تظهر أيضًا النتائج التي لم تكتمل ، وهي معلقة.

يمكن تقديم النتائج الأولية بناءً على طلب العميل. يمكن استخدامها من قبل العميل لتحديد متطلبات اختبار إضافية. يمكن للمختبر استخدامها لنقل النتائج إلى العميل قبل إصدار التقرير النهائي.

عندما يتم تقديم النتائج الأولية في شكل شهادة تحليل ، فلن يتم التوقيع عليها. يشير التوقيع إلى أنه تم التحقق من النتائج والطلب من قبل موقّع فني ، وأن النتائج كاملة.

تنص طرق مرجعية معينة على أن العينات ذات النتائج الإيجابية المفترضة تتطلب مزيدًا من التأكيد. التأكيد إذن هو التزام لإكمال الطريقة ، والإبلاغ عن النتيجة النهائية على أنها "إيجابية" أو "تم الكشف عنها".

النتائج التي لا تحتوي على مستعمرات افتراضية تكون كاملة وفقًا للطريقة. لا يمكن إجراء مزيد من التأكيد ، وبالتالي لا توجد حاجة إلى نتيجة إضافية أو رسوم للتأكيد لهذه العينات.

وبالتالي يتم فصل النتائج والتكلفة الإضافية المرتبطة بإجراء التأكيدات.

تشير NR إلى نتيجة غير قابلة للإبلاغ عنها ، وستتم الإشارة إليها في عمود النتائج في شهادة توثيق البرامج. قد لا يتم الإبلاغ عن النتائج لعدد من الأسباب.

يتم الإبلاغ عن NR عندما لا تكون النتائج التي تم الحصول عليها سليمة من الناحية الميكروبيولوجية ، على سبيل المثال ، لا تكون الأعداد ضمن الحدود المقبولة في المختبر أو تؤثر مصفوفة الطعام على وسط الاختبار ، مما يؤدي إلى تعداد المستعمرات التي لا تصور الخصائص أو النتائج البكتيرية النموذجية.

في حالة NR ، يتم إزالة تكلفة هذا التحليل المحدد ويوصى بإعادة تقديم تلك العينة المعينة للتحليل للحصول على نتائج قاطعة.


الخطوط العريضة لدورة علم الأحياء الدقيقة الأساسية

يتعرف الطلاب في هذا المقرر على الجوانب النظرية والعملية للتجارب التالية والتي ترد تفاصيلها في الجدول 1:

عزل الكائنات الدقيقة من عينات الغذاء

التعرف على أنواع وجنس البكتيريا غير المعروفة من خلال سلسلة من التجارب التي تتضمن تلوين الجرام والنمو على الوسائط الانتقائية والتفاضلية واختبار أوكسيديز واختبار API20E

مقارنة تأثيرات المضادات الحيوية الأمبيسلين والكاناميسين على البكتيريا موجبة الجرام وسالبة الجرام


الأخبار و الأحداث

هل هناك فرق بين العلاج عند نقطة الاستخدام وتعليمات ما قبل التنظيف؟

يمكن أن تأتي تعليمات استخدام مستندات (IFU) بأشكال وأحجام مختلفة ، وبالنظر إلى هذه المستندات ، قد يظهر مصطلح "التنظيف المسبق" عدة مرات في مراحل مختلفة من.

معالجة إزالة التلوث من معدات الحماية الشخصية (PPE): الميثيلين الأزرق والضوء يثبطان نشاط فيروس كورونا التنفسي الحاد الوخيم 2 (SARS-CoV-2) على أجهزة التنفس N95 والأقنعة الطبية مع الحفاظ على السلامة والملاءمة

أدى جائحة فيروس كورونا 2019 (COVID-19) إلى نقص في معدات الحماية الشخصية (PPE) ، مما يؤكد الحاجة الملحة إلى طرق بسيطة وفعالة وغير مكلفة لتطهير الأقنعة وأجهزة التنفس.

MDM West 2021 & # 8211 أنهايم ، كاليفورنيا

تاريخ الفعالية: 10 أغسطس 2021

سجل الآن & gt & gt يسعدنا أن نعلن أن Nelson Labs ستعرض في الكشك رقم 3135 مع الشركة الشقيقة Sterigenics في المعرض التجاري 2021 MDM West ، في.

مختبرات نيلسون ، ذ
6280 S. طريق ريدوود.
سالت ليك سيتي ، يوتا 84123
+1 (800) 826-2088
+1 (801) 290-7500

Nelson Labs NV
Romeinsestraat 12
B-3001 لوفين ، بلجيكا
+32 (0) 16 40 04 84


منتسب إلى جامعة صينية

Qiu طبيبة من تيانجين بالصين ، أتت إلى كندا للدراسات العليا في عام 1996. وهي لا تزال منتسبة للجامعة هناك وقد جلبت العديد من الطلاب على مر السنين للمساعدة في عملها.

حاليًا رئيس قسم تطوير اللقاحات والعلاجات المضادة للفيروسات في برنامج مسببات الأمراض الخاصة في المختبر ، المجال الأساسي Qiu & # x27s هو علم المناعة. تركز أبحاثها على تطوير اللقاحات وعلاجات ما بعد التعرض والتشخيص السريع لفيروسات مثل الإيبولا.

وهي أيضًا أستاذة مساعدة في قسم الأحياء الدقيقة الطبية بجامعة مانيتوبا.

يعمل تشنغ أيضًا في المختبر كعالم أحياء. وقد نشر أوراقًا بحثية حول عدوى فيروس نقص المناعة البشرية ومتلازمة الجهاز التنفسي الحادة الوخيمة (سارس) وعدوى الإشريكية القولونية ومتلازمة كروتزفيلد جاكوب.

ال تلقى RCMP إحالة من وكالة الصحة العامة الكندية (PHAC) في 24 مايو.

& quot واستنادًا إلى المعلومات التي تم تلقيها حتى الآن ، فإن RCMP قد قيمت أنه لا يوجد تهديد للسلامة العامة في هذا الوقت ، وقال روبرت سيرين في رسالة بريد إلكتروني إلى CBC News يوم الخميس.

تصفها مؤسسة الرعاية الصحية الأولية (PHAC) بأنها خرق للسياسة و & quot ؛ الأمر الإداري & quot ، وتقول إن الإدارة تتخذ خطوات لحلها على وجه السرعة ، كما قال إيريك موريسيت ، رئيس العلاقات الإعلامية في وكالة الصحة & # x27s ، من أوتاوا.

وأضاف أنه لم يتم القبض على أي شخص أو حجزه في منزله.

عندما سئل عن الرد على أحدث التفاصيل ، قال موريسيت إنه لن يكون هناك المزيد من التعليقات & quot لأسباب تتعلق بالخصوصية. & quot

قالت متحدثة باسم وزيرة الصحة جينيت بيتيتباس تايلور إنها على علم بإجراء & quot؛ تحقيق إداري & quot في المختبر ولكن ليس لديها تعليق.

"يمكننا أن نؤكد للكنديين أنه لا يوجد أي خطر على الإطلاق على الجمهور الكندي وأن عمل NML مستمر في دعم صحة وسلامة جميع الكنديين ،" قال مدير الاتصالات ماتيو فيليون في رسالة بالبريد الإلكتروني يوم السبت.

لم يرد ماثيو جيلمور ، المدير العام العلمي لل NML ، على طلب للتعليق.

قال متحدث باسم وكالة خدمات الحدود الكندية إن الوزارة لن تؤكد أو تنفي ما إذا كان قد تم القبض على أي شخص أو قيد التحقيق. وقالت جوديث جادبويس سانت سير في رسالة بالبريد الإلكتروني يوم الخميس إن هذه المعلومات لن تكون علنية إلا إذا تم توجيه التهم.

ولم يتسن الوصول إلى أي شخص من السفارة الصينية للتعليق.


أنواع مختلفة من الوسائط المستخدمة في مختبر الأحياء الدقيقة

تحتوي وسائط الثقافة على العناصر الغذائية ومعايير النمو الجسدي اللازمة لنمو الميكروبات. لا يمكن أن تنمو جميع الكائنات الحية الدقيقة في وسط استزراع واحد ، وفي الواقع لا يمكن للعديد منها أن تنمو في أي وسط استزراع معروف. تُعرف الكائنات الحية التي لا يمكنها النمو في وسط المزرعة الاصطناعية بالطفيليات الملزمة. المتفطرة الجذاموالريكتسيا والكلاميديا ​​و اللولبية pallidumareتلزم الطفيليات. يمكن تمييز وسائط الاستزراع البكتيري بناءً على التركيب والاتساق والغرض.

تصنيف الوسائط الثقافية المستخدمة في مختبر الأحياء الدقيقة على أساس الاتساق

  1. وسط صلب: & # 8211 وسط صلب يحتوي على أجار بتركيز 1.5-2.0٪ أو بعض العوامل الأخرى ، معظمها مادة صلبة خاملة. الوسط الصلب له بنية فيزيائية ويسمح للبكتيريا بالنمو بطرق مفيدة أو مفيدة (مثل المستعمرات أو في خطوط). الوسط الصلب مفيد لعزل البكتيريا أو لتحديد خصائص الخلية المعزولة.
  2. وسائط شبه صلبة: & # 8211 يتم تحضيرها بأجار بتركيزات 0.5٪ أو أقل. لديهم الكاسترد الناعم مثل الاتساق ومفيد في زراعة البكتيريا الدقيقة أو لتحديد الحركة البكتيرية.
  3. سائل (مرق) متوسط: & # 8211 تحتوي هذه الوسائط على كميات محددة من العناصر الغذائية ولكن ليس لها أثر لعوامل التبلور مثل الجيلاتين أو الأجار. يخدم وسط المرق أغراضًا مختلفة مثل تكاثر عدد كبير من الكائنات الحية ودراسات التخمير والعديد من الاختبارات الأخرى. على سبيل المثال اختبارات تخمير السكر MR-VR مرق.

تصنيف وسائل الإعلام الثقافية على أساس التكوين

  1. وسط اصطناعي أو محدد كيميائيًا: & # 8211 الوسيط المحدد كيميائيًا هو الوسيط المحضر من المكونات النقية ، وبالتالي يُعرف موقعه الدقيق.
  2. وسيط غير اصطناعي أو غير معرف كيميائيًا: & # 8211 يحتوي الوسط غير الاصطناعي على مكون واحد على الأقل لم يتم تنقيته أو وصفه تمامًا ولا حتى متسقًا تمامًا من دفعة إلى أخرى. غالبًا ما تكون هذه بروتينات مهضومة جزئيًا من مصادر مختلفة للكائنات الحية. مرق المغذيات ، على سبيل المثال ، مشتق من مزارع الخمائر.

تصنيف وسائط الثقافة البكتيرية على أساس الغرض / الاستخدام الوظيفي / التطبيق

هناك حاجة إلى العديد من الوسائط ذات الأغراض الخاصة لتسهيل التعرف على أنواع معينة من البكتيريا وتعدادها وعزلها. لتلبية هذه الاحتياجات ، تتوفر العديد من الوسائط.

  1. وسائط الأغراض العامة / الوسائط الأساسية: & # 8211 الوسائط القاعدية هي في الأساس وسائط بسيطة تدعم معظم البكتيريا غير الحساسة. تعتبر مياه الببتون ومرق المغذيات وأجار المغذيات بمثابة وسط قاعدي. تستخدم هذه الوسائط بشكل عام للعزل الأولي للكائنات الحية الدقيقة.
  2. الوسط المخصب (عوامل النمو المضافة): & # 8211 إضافة عناصر غذائية إضافية على شكل دم ، مصل ، صفار البيض ، إلخ ، إلى الوسط القاعدي يجعلها وسائط غنية. تستخدم الوسائط المخصبة لنمو البكتيريا (شديدة الحساسية) من الناحية التغذوية. أجار الدم وأجار الشوكولاتة ومنحدر مصل لوفلر وما إلى ذلك هي بعض الوسائط الغنية. يتم تحضير أجار الدم بإضافة 5-10٪ (بالحجم) من الدم إلى قاعدة أجار الدم. يُعرف أجار الشوكولاتة أيضًا بأجار الدم الساخن أو أجار الدم المكسور.
  3. الوسائط الانتقائية والإثرائية: & # 8211 وهي مصممة لتثبيط البكتيريا المتعايشة أو الملوثة غير المرغوب فيها وتساعد على استعادة مسببات الأمراض من خليط من البكتيريا. في حين أن الوسائط الانتقائية تعتمد على أجار ، فإن وسائط التخصيب سائلة في الاتساق. كل من هذه الوسائط تخدم نفس الغرض. يمكن جعل أي وسائط أجار انتقائية عن طريق إضافة عوامل مثبطة معينة لا تؤثر على العامل الممرض المعني. تشمل الأساليب المختلفة لجعل الوسيط انتقائيًا إضافة المضادات الحيوية والأصباغ والمواد الكيميائية وتغيير الأس الهيدروجيني أو مزيج من هذه. & # 8211الوسيط الانتقائي: & # 8211قمع النمو التفاضلي. تم تصميم الوسط الانتقائي لقمع نمو بعض الكائنات الحية الدقيقة مع السماح بنمو أخرى. الوسيط الانتقائي هو وسط (صلب) قائم على أجار بحيث يمكن عزل المستعمرات الفردية.

تتضمن أمثلة الوسائط الانتقائية ما يلي:

  • يستخدم ثاير مارتن أجار لاستعادة النيسرية السيلانية التي تحتوي على مضادات حيوية فانكومايسين وكوليستين ونيستاتين.
  • يستخدم مانيتول ملح أجار وأجار ملح الحليب لاستعادة المكورات العنقودية الذهبية يحتوي على 10٪ كلوريد الصوديوم.
  • وسط تيلوريت البوتاسيوم المستخدم لاستعادة الخناق يحتوي على 0.04٪ تيلوريت البوتاسيوم.
  • يحتوي أجار MacConkey المستخدم لأعضاء Enterobacteriaceae على ملح الصفراء الذي يثبط معظم البكتيريا موجبة الجرام.
  • Pseudogel Agar (Cetrimide Agar) المستخدم لاستعادة P. aeruginosa يحتوي على cetrimide (عامل مطهر).
  • أجار الدم البنفسجي الكريستالي المستخدم لاستعادة S. pyogenes يحتوي على 0.0002٪ من الكريستال البنفسجي.
  • يتم استخدام Lowenstein Jensen Medium لاستعادة M. tuberculosis بشكل انتقائي من خلال دمج أخضر الملاكيت.
  • أجار ويلسون وبلير لاستعادة S. typhi أصبح انتقائيًا بإضافة صبغة خضراء لامعة.
  • تحتوي الوسائط الانتقائية مثل TCBS Agar المستخدمة لعزل ضمة الكوليرا من عينات البراز على درجة حموضة مرتفعة (8.5-8.6) ، مما يثبط معظم البكتيريا الأخرى. & # 8211وسط ثقافة الإثراء: & # 8211يستخدم وسط التخصيب لزيادة التركيز النسبي لبعض الكائنات الحية الدقيقة في المزرعة قبل الطلاء على وسط انتقائي صلب. على عكس الوسائط الانتقائية ، عادة ما تستخدم ثقافة الإثراء كوسيط مرق. وسائط التخصيب هي وسائط سائلة تعمل أيضًا على تثبيط التعايش في العينة السريرية. يتم استخدام مرق السيلينايت F ومرق رباعي الإيثيونات وماء الببتون القلوي (APW) لاستعادة مسببات الأمراض من عينات البراز.
  1. متوسط ​​التفاضل / المؤشر: & # 8211 تم تصميم بعض الوسائط بطريقة يمكن من خلالها التعرف على البكتيريا المختلفة على أساس لون مستعمرتها. تشمل الأساليب المختلفة دمج الأصباغ والركائز الأيضية وما إلى ذلك ، بحيث تظهر تلك البكتيريا التي تستخدمها كمستعمرات مختلفة الألوان. تسمى هذه الوسائط الوسائط التفاضلية أو وسائط المؤشر. تسمح الوسائط التفاضلية بنمو أكثر من كائن حي دقيق واحد مهم ولكن مع مستعمرات يمكن تمييزها شكليًا.

تتضمن أمثلة الوسائط التفاضلية ما يلي:

  • أملاح مانيتول أجار (تخمير مانيتول = أصفر)
  • أجار الدم (أنواع مختلفة من انحلال الدم مثل انحلال الدم α و و)
  • Mac Conkey agar (تخمير اللاكتوز ، المستعمرات الوردية ، بينما ينتج التخمير غير اللاكتوز مستعمرات شاحبة أو عديمة اللون.
  • TCBS (ضمة الكوليرا تنتج مستعمرات صفراء بسبب تخمر السكروز)
  1. وسائط النقل: & # 8211 يجب نقل العينات السريرية إلى المختبر فور جمعها لمنع النمو الزائد للكائنات أو المتعاشات الملوثة. يمكن تحقيق ذلك باستخدام وسائط النقل. تمنع هذه الوسائط تجفيف (تجفيف) العينة ، وتحافظ على العامل الممرض إلى النسبة المتعايشة وتمنع النمو الزائد للبكتيريا غير المرغوب فيها. بعض هذه الوسائط (Stuart’s & amp Amie’s) شبه صلبة من حيث الاتساق. تعمل إضافة الفحم على تحييد العوامل المثبطة.

* تستخدم وسيلة نقل كاري بلير ووسيلة فينكاترامان راماكريشنان (VR) لنقل البراز من مرضى الكوليرا المشتبه بهم.

* يستخدم محلول الجلسرين الملحي المخزن من ساش لنقل البراز من المرضى المشتبه في إصابتهم بالزحار العصوي.

* يتم استخدام وسط بايك لنقل المكورات العقدية من عينات الحلق.

  1. الوسائط اللاهوائية: تحتاج البكتيريا اللاهوائية إلى وسائط خاصة للنمو لأنها تحتاج إلى محتوى أكسجين منخفض وتقليل الأكسدة وإمكانية الاختزال ومغذيات إضافية.

قد يلزم تكميل وسائط اللاهوائية بالعناصر الغذائية مثل الهيمين وفيتامين ك. وقد يتعين أيضًا تقليل هذه الوسائط بالوسائل الفيزيائية أو الكيميائية. يعمل غليان الوسط على طرد أي أكسجين مذاب. يمكن أن تؤدي إضافة 1٪ جلوكوز ، 0.1٪ ثيوجليكولات ، 0.1٪ حمض أسكوربيك ، 0.05٪ سيستين أو برادة حديد ساخن أحمر إلى تقليل الوسط. قبل الاستخدام ، يجب غلي الوسط في حمام مائي لطرد أي أكسجين مذاب ثم ختمه ببارافين سائل معقم.

يحتوي وسط روبرتسون للحوم المطبوخة (RCM) الذي يشيع استخدامه في زراعة أنواع المطثيات على عمود 2.5 سم من لحم قلب الثور و 15 مل من مرق المغذيات. يحتوي مرق ثيوجليكولات على ثيوجليكولات الصوديوم والجلوكوز والسيستين وخلاصة الخميرة والكازين المائي.

الميثيلين الأزرق أو ريسازورين هو مؤشر محتمل للحد من الأكسدة مدمج في الوسط. في ظل حالة مخفضة ، يكون الميثيلين الأزرق عديم اللون.


معمل 4: تعداد الكائنات الدقيقة - علم الأحياء

Wolbachia هي بكتيريا شائعة داخل الخلايا توجد في المفصليات والديدان الخيطية. تنتقل هذه البكتيريا المتعايشة بين البكتيريا عموديًا من خلال بيض المضيف وتغير بيولوجيا العائل بطرق متنوعة. داخل المفصليات ، Wolbachia هو طفيلي تناسلي ، يتلاعب ببيولوجيا التكاثر للمضيفين لزيادة انتقاله. على الرغم من أن Wolbachia موروث عموديًا ، إلا أنه يمكن أيضًا أن يتحرك أفقيًا عبر حدود الأنواع ، مما يؤدي إلى انتشار واسع النطاق وعالمي في مضيفات اللافقاريات المتنوعة.

تنتشر الكائنات الحية الدقيقة التي تنتقل من جيل إلى جيل من خلال مضيفيها (أي الكائنات الدقيقة القابلة للتوريث) بين الحيوانات. يتم توريثها عادةً من خلال سيتوبلازم مضيفيها ، ولكن توجد أيضًا آليات انتقال أخرى. وتتراوح أنواع الكائنات الحية الدقيقة المعنية من الفيروسات إلى البكتيريا والفطريات والأوليات. تتراوح تفاعلات الكائنات الحية الدقيقة القابلة للتوريث مع مضيفيها من التبادلية (المفيدة) إلى الطفيلية. هناك أدلة متزايدة على أن الكائنات الحية الدقيقة القابلة للتوريث مهمة للغاية في التطور. أكثر الكائنات الحية الدقيقة القابلة للتوريث انتشارًا هي الكائنات الحية الدقيقة المتعايشة مع بكتيريا Wolbachia. تطورت هذه المجموعة المذهلة من الريكتسيا داخل الخلايا كطفيليات تكاثرية لمفصليات الأرجل. تعتبر هذه البكتيريا ذات أهمية خاصة لأنها قد تسبب تنوعًا سريعًا في مضيفيها ، كما أنها ذات قيمة محتملة في المكافحة البيولوجية لحشرات الآفات.

ترتبط بكتيريا Wolbachia ارتباطًا وثيقًا بالمرض الذي يسبب Ehrlichia و Anaplasma و Rickettsia. على عكس هؤلاء الأقارب المقربين ، لا يعرف Wolbachia أنه يصيب الفقاريات بشكل مباشر ، ولكنه يصيب مجموعة واسعة من المفصليات الأرضية والديدان الخيطية. يوضح الشكل أدناه العلاقات التطورية للبكتيريا Wolbachia والبكتيريا الأخرى ذات الصلة الوثيقة. تم تعديل الشجرة من Lo et al. 2007. العلاقة بين مجموعات Wolbachia المختلفة وتفاعلاتها مع المضيفين موضحة (يمين). تم تعديل الشجرة بعد (Dunning Hotopp et al.2006). تعتبر بكتيريا Wolbachia داخل المفصليات (الزرقاء) طفيلية إلى حد كبير ، وغالبًا ما تتلاعب ببيولوجيا التكاثر للمضيفين (انظر أدناه). تعتبر Wolbachia داخل الديدان الخيطية (الخضراء) متبادلة إلى حد كبير ، مع Wolbachia ضرورية لبقاء العائل. يمثل حجم المثلث التنوع الموصوف داخل كل سلالة. تمثل الدوائر سلالة تعتمد على سلالة واحدة من Wolbachia.

طورت Wolbachia داخل المفصليات أربعة أنماط رئيسية للتلاعب ببيولوجيا التكاثر في العائل من أجل زيادة انتقالها. يعد أسلوب انتقالها أمرًا حاسمًا لفهم بيولوجيا وتطور Wolbachia. لا تنتقل بكتيريا Wolbachia بسهولة من مضيف إلى آخر. وبدلاً من ذلك ، تنتقل بكتيريا Wolbachia بشكل حصري تقريبًا من الأم إلى النسل عن طريق البيض المصاب. يمكن أن يصاب الذكور بـ Wolbachia لكن الذكور لا ينقلون Wolbachia إلى الأبناء أو أي مضيف آخر. يشمل التلاعب التناسلي للمضيفين بواسطة Wolbachia 1) تأنيث الذكور المصابين (تحويل الذكور الوراثي إلى إناث). 2) التوالد العذري المستحث (التكاثر بدون الذكور) 3) قتل الذكور المصابين و 4) عدم التوافق السيتوبلازمي (CI) ، تعديل الحيوانات المنوية من الذكور المصابة مما يؤدي إلى حدوث عيوب جنينية والوفاة عند إخصاب الحيوانات المنوية للبويضات غير المصابة بالمثل.

ربما يكون التأنيث هو الاستراتيجية الأكثر فائدة لبكتيريا موروثة من الأم مثل Wolbachia. مع كون الذكور طريقًا مسدودًا لوراثة معظم العوامل السيتوبلازمية (مثل Wolbachia والميتوكوندريا) ، يضاعف تحويل ذرية الذكور الجينية المصابة إلى إناث من احتمال انتقال بكتيريا Wolbachia إلى الجيل التالي. ومع ذلك ، حتى الآن ، فإن التأنيث الناجم عن Wolbachia هو الأكثر ندرة وصفًا للأنماط الظاهرية الأربعة الرئيسية التي يسببها Wolbachia ، والتي تم الإبلاغ عنها في ثلاثة أوامر من مفصليات الأرجل فقط. تم توثيق تأنيث Wolbachia بشكل أكثر شيوعًا في العديد من أنواع isopod الأرضية ضمن ترتيب Oniscidae. من بين الحشرات ، من المعروف حاليًا أن التأنيث الناجم عن بكتيريا Wolbachia يحدث فقط في Lepidoptera و Hemiptera.

مع كون الذكور طريقًا مسدودًا تطوريًا لميراث Wolbachia ، فإن الإستراتيجية الواضحة الأخرى للتلاعب بالعائل من خلال التعايش الداخلي الموروث من الأم هي تحفيز التوالد العذري ، وهو إنتاج ذرية من الإناث دون إخصاب بواسطة الحيوانات المنوية. كما هو الحال مع التأنيث الناجم عن بكتيريا Wolbachia ، فإن تحريض التوالد العذري يضاعف من احتمال انتقال Wolbachia إلى الجيل التالي ، لأن جميع السلالات من الإناث. حاليًا ، يُعرف التوالد العذري الناجم عن بكتيريا Wolbachia من ثلاثة أنواع مختلفة من مفصليات الأرجل Thysanoptera (Thrips) و Acari (mites) و Hymenoptera (الدبابير).

النمط الظاهري الثالث الذي تسببه بكتيريا Wolbachia هو قتل الذكور الوراثي. يجب أن تطور Wolbachia هذا النمط الظاهري فقط عندما يفيد قتل الذكور المصابين الأشقاء الإناث المصابات على قيد الحياة. وبالتالي ، فإن المضيفين الذين لديهم منافسة عالية بين الأشقاء على الموارد هم فقط أولئك الذين يجب أن يستمر قتل الذكور من Wolbachia. حتى الآن ، تم وصف عدوى بكتيريا Wolbachia القاتلة للذكور في أربعة أوامر مختلفة من مفصليات الأرجل. داخل الحشرات ، تشمل هذه Diptera و Coleoptera و Lepidoptera. خارج Insecta ، تم الإبلاغ عن قتل الذكور في Pseudoscorpiones (فئة Arachnida).

عدم توافق السيتوبلازم (CI)

النمط الظاهري الناجم عن Wolbachia الموصوف والأكثر تنوعًا نسبيًا هو CI ، المعروف حاليًا من ثمانية أوامر مفصلية مختلفة على الأقل: Acari و Coleoptera و Diptera و Isopoda و Lepidoptera و Hymenoptera و Homoptera و Orthoptera. يظهر CI عندما يتزاوج ذكر مصاب بالبكتيريا Wolbachia مع أنثى تفتقر إلى نفس نوع Wolbachia (إما غير مصاب أو مصاب بنوع مختلف من Wolbachia). جميع تركيبات الصلبان الأخرى متوافقة. في الكائنات ثنائية الصبغيات ، تكون نتيجة التهجين غير المتوافق زيادة معدل الوفيات الجنينية. في أقصى حالاتها ، عندما يتزاوج ذكر مصاب بالبكتيريا مع أنثى غير مصابة ، يموت جميع النسل (الهجين غير المتوافق). نفس الذكر المصاب الذي يتزاوج مع أنثى مصابة بالمثل (هجين متوافق) لا يرى زيادة في وفيات الأبناء. يمكن تفسير انتشار مثل هذه البكتيريا من خلال السكان بسهولة نظريًا. باختصار ، في مجموعة سكانية مختلطة (مع كل من الأفراد المصابين وغير المصابين) ، يزيد وجود الذكور المصابة بالبكتيريا من اللياقة النسبية للإناث المصابات عن طريق تقليل لياقة الإناث غير المصابات.

Wolbachia والتحويلات الجينية الجانبية

كان يُعتقد حتى وقت قريب أن نقل الجين الجانبي من البكتيريا إلى حقيقيات النوى متعددة الخلايا نادر أو غير موجود. أصبح من الواضح الآن أن مثل هذه التحويلات من Wolbachia إلى جينومات مضيفيها منتشرة على نطاق واسع. تم وصف أول عملية نقل من هذا القبيل في خنفساء الفاصوليا adzuki ، حيث تم دمج نقل قديم لجزء كبير من كروموسوم Wolbachia في كروموسوم الخنفساء X. أشار تحليل تسلسل الجينوم الكامل من العديد من أنواع المفصليات والديدان الخيطية إلى أن نقل الجينات من Wolbachia إلى المضيف منتشر على نطاق واسع. تتراوح الجينات المنقولة من شظايا جين Wolbachia الصغيرة الموجودة في جينومات الزنبور الطفيلي Nasonia ، إلى نقل كروموسوم Wolbachia بالكامل تقريبًا إلى جينوم ذبابة الفاكهة Drosophila ananassae. في الآونة الأخيرة ، تم اكتشاف نقل آخر واسع النطاق لجينوم Wolbachia إلى جينوم مضيف في خنفساء Longicorn. في حين أن مصير عمليات النقل الجيني الجانبي هذه غير معروف إلى حد كبير ، إلا أن الأمثلة تظهر الآن حيث اكتسبت جينات Wolbachia المنقولة وظيفة داخل جينوم المضيف. داخل حشرات المن ، تم نقل الجينات من Wolbachia (أو قريب من Wolbachia) إلى جينوم المضيف ويتم التعبير عنها بشكل كبير في الخلية الجرثومية للحشرة. في البعوضة ، Aedes aegypti ، من المحتمل أن يتم نقل جينين متجاورين من Wolbachia إلى جينوم البعوض ويتم التعبير عنها بمستويات عالية نسبيًا ، مما يشير إلى أن هذه الجينات قد اكتسبت وظيفة داخل جينوم البعوض. يظهر جين آخر داخل جينوم البعوض تشابهًا مع جين Wolbachia ، ولكن من المحتمل أن يكون نتيجة للانتقال من البعوض إلى Wolbachia.

Wolbachia في النيماتودا الفيلارية

النيماتودا الخيطية هي ديدان طفيلية صغيرة يمكن أن تسبب أمراضًا خطيرة للإنسان والحيوانات الأخرى. تم وصف Wolbachia في نسبة كبيرة من أنواع النيماتودا الفيلارية. على عكس الالتهابات في معظم المفصليات ، يبدو أن Wolbachia داخل الديدان الخيطية الفيلارية قد تطورت إلى التبادلية - Wolbachia ضروري لبقاء الدودة الخيطية وتكاثرها. في الآونة الأخيرة ، أصبح من الواضح أن بكتيريا Wolbachia يمكن أن تسهم بشكل كبير في إمراضية عدوى الديدان الخيطية. بسبب مشاركتها الأساسية في بيولوجيا النيماتودا الفيلارية ، أصبحت Wolbachia الآن أهدافًا واضحة للعلاجات التي تتحكم في عدوى الديدان الخيطية. لمراجعة تفاعلات Wolbachia - النيماتودا الخيطية ، انظر Taylor et al. 2005. للحصول على مزيد من المعلومات حول استخدام العوامل المضادة للبكتيريا لعلاج عدوى الديدان الخيطية ، راجع اتحاد Anti-Wolbachia.


معمل 4: تعداد الكائنات الدقيقة - علم الأحياء

بكتيريا حمض اللاكتيك (صفحة 1)


Lactobacillus acidophilus هذه البكتيريا هي عضو في النباتات الطبيعية للإنسان ، توجد في تجويف الفم والأمعاء الدقيقة وظهارة المهبل ، حيث يعتقد أنها تلعب دورًا مفيدًا. الكائن الحي هو عمومًا أول بكتيريا مدرجة في تركيبات الكائنات الحية المجهرية.


بكتيريا حمض اللاكتيك (LAB) هي مكورات أو عصيات أو عصيات أو عصيات موجبة الجرام أو عصيات أو عصيات بتكوين قاعدة الحمض النووي أقل من 53 مول٪ G + C. عادة ما تكون غير تنفسية وتفتقر إلى الكاتلاز. إنهم يخمرون الجلوكوز في المقام الأول إلى حمض اللاكتيك ، أو إلى حمض اللاكتيك ، CO2 والإيثانول. تنمو جميع LAB بشكل لاهوائي ، ولكن على عكس معظم اللاهوائيات ، فإنها تنمو في وجود O2 باسم "اللاهوائية الهوائية". على الرغم من أنها تفتقر إلى الكاتلاز ، إلا أنها تمتلك ديسموتاز الفائق ولديها وسائل بديلة لإزالة السموم من جذور البيروكسيد ، بشكل عام من خلال إنزيمات البيروكسيديز.

على الرغم من أن العديد من أجناس البكتيريا تنتج حمض اللاكتيك كمنتج نهائي أولي أو ثانوي للتخمير ، فإن مصطلح بكتيريا حمض اللاكتيك محجوز تقليديًا للأجناس بالترتيب Lactobacillales ، والذي يتضمن Lactobacillus و Leuconostoc و Pediococcus و Lactococcus و Streptococcus ، بالإضافة إلى Carnobacterium ، المكورات المعوية ، Oenococcus ، Tetragenococcus ، Vagococcus ، و Weisella.

نظرًا لأنها تحصل على الطاقة فقط من استقلاب السكريات ، فإن بكتيريا حمض اللاكتيك تقتصر على البيئات التي توجد فيها السكريات. لديهم قدرة محدودة على التخليق الحيوي ، حيث تطورت في بيئات غنية بالأحماض الأمينية والفيتامينات والبيورينات والبيريميدين ، لذلك يجب زراعتها في وسائط معقدة تلبي جميع متطلباتها الغذائية. معظمهم يعيشون بحرية أو يعيشون في روابط مفيدة أو غير ضارة مع الحيوانات ، على الرغم من أن بعضها من مسببات الأمراض الانتهازية. توجد في الحليب ومنتجات الألبان وفي المواد النباتية المتحللة. إنها نباتات طبيعية للإنسان في تجويف الفم والأمعاء والمهبل ، حيث تلعب دورًا مفيدًا.

عدد قليل من LAB هي مسببة للأمراض للحيوانات ، وأبرزها بعض أعضاء جنس Streptococcus. في البشر ، تعتبر Streptococcus pyogenes سببًا رئيسيًا للمرض (التهاب الحلق والالتهاب الرئوي والتهابات قيحية أخرى ، الحمى القرمزية وأنواع أخرى من السموم) ، تسبب Streptococcus pneumoniae الالتهاب الرئوي الفصي والتهاب الأذن الوسطى والتهاب السحايا. تسوس وقد يكون سببًا خبيثًا لالتهاب الشغاف. يتم التعامل مع المكورات العقدية المسببة للأمراض في مكان آخر من النص. يتعامل هذا الفصل بشكل أساسي مع LAB بالاشتراك مع علم الأحياء الدقيقة للأغذية ومنتجات الألبان ، وبدرجة أقل مع LAB كمكونات مفيدة للنباتات البشرية الطبيعية والبروبيوتيك.

تعد بكتيريا حمض اللاكتيك من أهم مجموعات الكائنات الحية الدقيقة المستخدمة في تخمير الطعام. إنها تساهم في طعم وملمس المنتجات المخمرة وتمنع بكتيريا تلف الطعام عن طريق إنتاج مواد مثبطة للنمو وكميات كبيرة من حمض اللاكتيك. كعوامل للتخمير ، تشارك LAB في صنع الزبادي والجبن والزبدة والقشدة الحامضة والسجق ومخللات الخيار والزيتون ومخلل الملفوف ، ولكن بعض الأنواع قد تفسد البيرة والنبيذ واللحوم المصنعة.


تخزين قصير المدى

يمكن لصق مخزون البكتيريا العامل على ألواح أجار وتخزينها عند 4 درجات مئوية للاستخدام اليومي أو الأسبوعي. يجب تغليف أطباق الثقافة بفيلم مانع للتسرب للمختبر (بلاستيك أو بارافين) وتخزينها مقلوبًا (جانب أجار للأعلى) لتقليل التلوث والحفاظ على كل من الثقافة والأجار رطبًا بشكل صحيح. Some bacterial strains can be stored for up to 1 year at 4°C in agar stab cultures, which are especially useful for transporting samples to other research facilities. Stab cultures are prepared by first sterilizing strain-compatible agar (e.g., lysogeny broth [LB] agar for E. coli) and then transferring the warm liquid agar to screw-cap vials using the appropriate aseptic technique. After the agar has solidified, a single colony is picked from an actively growing culture using a sterile, straight wire. The wire with the bacteria is then plunged deep into the soft agar several times, and the vial is incubated at 37°C for 8–12 hours with the cap slightly loose. The vial is then sealed tightly and stored in the dark at 4°C.

Table 1. Approximate time bacterial cultures remain viable in different storage conditions.


Details

This method is applicable to the procedures used for examination of environmental samples including swabs from carcasses in meat processing plants, swabs of food preparation surfaces and other environmental samples such as cloths collected from the food manufacturing environment and bottle rinses. This support method must be used in conjunction with accredited methods for the detection of bacteria in foods and includes the use of three different types of swab.

This method is well referenced and represents a good minimum standard for food, water and environmental microbiology. However, in using Standard Methods, laboratories should take account of local requirements and it may be necessary to undertake additional investigations.

The performance of a standard method depends on the quality of reagents, equipment, commercial and in-house test procedures. Laboratories should ensure that these have been validated and shown to be fit for purpose. Internal and external quality assurance procedures should also be in place.


شاهد الفيديو: علم الاحياء الدقيقة-عملي Media preperation المعمل السادس عبد اللطيف (أغسطس 2022).